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食物过敏原的检测方法

2008-12-08 11:14 来源:医学教育网     【 】【打印】【我要纠错

  食物过敏原的检测方法

  (一)双盲食物激发试验:

  双盲食物激发试验为诊断食物过敏的金标准,主要用于以下情况:

  (1)几种食物同时被怀疑为过敏原且特异性IgE(sIgE)阳性,为减少患者禁食种类时可使用;

  (2)高度怀疑某一过敏物,但无sIgE抗体的证据,为进一步确定进食该食物的安全性时使用;

  (3)非IgE介导型食物过敏者多用该方法。患者应先进行排除饮食,然后施以食物刺激,在操作过程中为控制偏倚,可不让患者知道进食食物的种类或使用安慰剂,但对反应较严重的IgE阳性的过敏原。不宜做该试验。由于该试验有一定危险性,且近年来有证据表明定量IrE检测可预测DBPCFC的试验结果,结合临床病史多数食物过敏可得到确诊,故真正需进行DBPCFC的患者并不多。

  (二)皮肤针刺试验(SPT)

  SPT为临床常用的检测过敏原特异性IrE的体内试验。具体方法为用稀释抗原液点刺皮肤,同时进行阴、阳性对照,15min后观察检测点是否出现风团或潮红反应,如风团直径超过阴性对照3mm则为阳性,表明存在与过敏原IgE结合的肥大细胞。SPT最显著的优点是价格便宜,快速,而且可让有疑心的患者看到结果;但许多因素如季节,测试时间,待测区域,药物等都会影响其结果,且所用的蔬菜、水果等过敏原提取物缺乏稳定的蛋白,故该法的重现性较差。同时,不同地区及医院所检测的过敏原种类、浓度、判别标准及质控措施有很大差别,这使医院间共用结果受到限制。

  (三)体外IgE检测

  与体内试验相比,体外检测具有效能参数可靠,不受药物影响,无全身反应危险等优点,在下列情况下首选:(1)对过敏原极度敏感;(2)皮肤异常;(3)患者服用干扰皮肤反应的药物;(4)患者不合作或拒绝皮肤检测;(5)患者处于严重过敏反应后由于巨细胞介质耗尽所致的不应期。近年来,体外sIgE检测技术有了很大的发展。

  1.放射过敏原吸附试验(RAST):RAST为最早使用的过敏原检测方法。其主要原理是将过敏原结合到固定相,加入待测血清及参考对照,血清内存在的过敏原-slgE将吸附在固定相上,通过用放射性同位素标记的抗IrE二抗来检测血清中的sIgE。由于该法费用昂贵,花费时间长,放射性同位素易过期且污染环境,不同来源试剂盒的参比血清不同而不易相互比较,待检血清含有相同特异性IgG时可干扰正常结果,故目前已逐渐被测定帽(CAP)过敏原检测法所代替。

  2.测定帽(CAP)过敏原检测系统是目前国际上广泛应用并公认较为可靠的过敏原定量体外检测系统,主要原理为酶联免疫荧光测定法(FEIA)。CAP系统建立于新型固体相——装在小胶囊中的亲水性载体聚合物上,由一种经溴化氰活化的纤维素衍生物合成,与过敏原有极高的结合能力。其过程为将50标准血清或患者血清加入到固有相,再将酶标抗IgE二抗加入到固有相中,最后测定荧光并与标准曲线比较。CAP过敏原检测法测定范围为0.35~100KU^/L(A:allergensIgE),变异系数(CV)<10%。通常以sIgE>0.35KU^/L为临界点(即阳性反应),其阴性预报正确率达95%,敏感性也高达94%~100%,但其特异性较差,阳性预报正确率(PPV)则更低。若根据情况调整临界点,则可提高其特异性和PPV,该系统可分析常见的6种食物过敏原:鸡蛋、牛奶、花生、大豆、小麦和鱼。

  3.进口试剂和方法:这些方法的仪器试剂都很昂贵。

  4.生物芯片:近年来,渐趋成熟的蛋白质芯片技术因其高通量、微型化、平行性检测等优点,正越来越多的应用于药物筛选、肿瘤标志筛查J、临床检测等领域,被看作是最有前景的诊断工具。尽管近年来蛋白芯片检测过敏原有了很大发展,但有几个问题仍需解决:(1)玻璃基质本身的缺陷、芯片表面微尘的聚集及去湿化使蛋白芯片极易产生人为信号,而这些干扰信号是操作者不能简单识别的,因此,必须建立严格的标准以评估结果;(2)蛋白芯片点样不准确,批间差异较大,这还需通过点样技术的提高来克服。

  (四)生物共振技术

  目前,生物共振技术在食物过敏原检测中的应用受到越来越广泛的关注。过敏是一种生物物理信息现象,该现象在人体内产生需要过敏印痕的出现,这种过敏印痕来源于物质与人体的多次接触,然后逐渐产生基于物质信息的生物物理印痕,一旦人体产生了这种印痕信息,它就可能被维持并处于休眠状态,当再次接触过敏源时印痕被激活,并进而通过生物物理脉冲诱发常见的变态反应疾病。每种过敏印痕的信息是此种过敏原惟一的生物物理共振模式,使用共振技术可将致敏信号检测出来。

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