细胞培养中常见的污染情况总结如下:
常见的污染如下：
1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的灭菌情况，是否在高压灭菌时放气时间足够，压力足够！尤其是和储存培养液接触的移液管等物品，连续两次污染的话有可能造成储存液污染，一定要注意！下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象！
可在培养液中加相应的抗生素处理
2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，
用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有细胞暂时转移，采用过氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把过氧乙酸放置在孵箱内一个小时，使其蒸汽弥漫。待过氧乙酸的气味消散后，再移入细胞。孵箱应定期清洁（2月左右），尤其在多雨的季节。
其它培养箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外灯照。
预防霉菌污染，可在培养基里加3u/ml的两性霉素或制霉菌素或放线菌素D或双抗；但细胞一旦污染，很难挽救，制霉菌素或放线菌素D或双抗都于事无补，建议舍弃该污染细胞。，将环境彻底消毒，如果所有细胞都污染，可能是系统污染，检查一下培养基和器材，如果只是个别污染，可能是操作问题，就要注意操作
3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。
用泰乐菌素，兽用支原体病的药，但可用于细胞培养，无任何不良反应。Sigma公司的使用时用50ug/ml Tylosin培养液培养6天或连续传两代即可清除支原体污染。如果作为常用的抗生素的话, 建议用8ug/ml的浓度。
4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化，可在同一批号的血清养的细胞中发现类似现象。对细胞生长状态不会有明显影响，在细胞增殖旺盛之后会自然消失，除更换血清外无须特殊处理。建议如果细胞有可能是此种污染的话，可以增加细胞的种板密度，以提高细胞的生存率。
5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。
6、原虫：培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动，细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。他们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒问题、操作问题、环境问题等等
关于培养基的无菌状况，取培养基至培养瓶中（不加细胞），37度试培养一段时间后观察。如果没有细菌生长 就是操作的问题。
也可以在培养基中事先加入双抗（硫酸链霉素和氨苄青霉素）。但双抗有时会影响细胞的状态，所以在做转染、检测细胞某项指标前一定要撤去双抗，以避免影响实验结果。
1、孵箱应定期用三氧机消毒 或者 紫外光照射，并用酒精和新洁尔灭试擦孵箱同时孵箱内的水应是三蒸水
2、超净台\取材\器材\培养液\培养瓶\操作等因素
3、超净台的风机不能过大，风机到6-8格。否则也可能能致霉菌污染
4、无菌室经甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水喷洒中和，约几小时即可进入操作。
感谢你的辛勤劳动！
以上均源自上相关贴子,然后加以总结希望对大家有用!!
正愁分不清各种细菌呢，真是及时雨啊
污染是细胞培养第一大害！
不过好像一般普通培养真菌污染的概率比较大些，因为培养基中常会加入细菌抗生素
非常谢谢!我们实验估计是黑胶虫污染.
很好！我培养的细胞，个别孔已发现霉菌，正在处理中。
感谢，，，现在细胞老污染，，多了点知识。。
谢谢，我们实验室也经常看到黑胶虫，有人总认为是细菌，结果细菌培养是阴性。更换血清就可以了吗？
原来看到的心肌细胞培养专栏哪去了？有谁知道?
非常感谢!
有哪些老师有好的图片也传上来就好了.
我的细胞死完了还找不到很确定的原因.
thanks,your suggestion and manmaps is very idealty.
关于“黑胶虫”或“黑蛟虫”或“黑焦虫”的性质或本质，有谁能提供点资料么？比如生物学分类，生活习性，结构形态，高倍镜或电镜图片。另外，有英文相关文献么？至少名字有英文的么？有人研究这种“虫子”或“微生物”或“纳米级细菌”么？
我们实验室这段时间经常污染。在低倍镜下观察，是很多黑色的小点，在 高倍镜下，发现黑色小点在原地轻微的颤动，这是黑胶虫吗
我的细胞也怀疑是黑胶虫污染,但是否经空气传播?因为同一培养箱中有的细胞中,高倍镜下可见小黑点游动,有的就没有,且黑点会长成黑虫
关于黑胶虫：
根据平时的操作，我觉得“黑胶虫”有没有可能是以下操作细节方面的问题导致的呢？
1、有时候血清瓶或者培养瓶上用标记笔写的字没有擦掉就直接泡酸，字迹溶解后沉积在酸缸中浸泡的瓶子里冲洗不净。
2、过火的时候不小心碰到酒精灯的灯芯，粉尘飞进培养液内。
3、有的同学习惯将移液管塞棉花的一端在酒精灯上焚烧一下，灰烬飞进培养液内。
请教！
我们实验室就曾经利用制霉菌素制服过真菌污染，拯救了细胞，回想起来真是＂惊心动魄＂啊！
看贴后,我怀疑我的杂交瘤被霉菌污染了.
24孔板中央老是有絮状物,细胞没死,但生长不佳.将絮状物吸出后,第二天又有.并且将细胞裹在里面生长.请问这样的瘤细胞能不能上腹水.
我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。谢谢！（我养的都是肿瘤细胞）
很好，要是有污染的照片就更直观！！
谢谢 lz经验很好
建议附上图片，将此帖置顶！
“黑胶虫”=子虚乌有
我正在找这方面的资料,谢谢了!
污染后，培养液味道变臭了是什么污染。
zhyy_ping :
培养液味道变臭了应该是厌养菌污染.
我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。我也有同样问题，
malone2001 wrote:
我培养基里都加了双抗，刚开始一瓶肿瘤细胞状态还好，但过了两三天培养基里会出现很多一团团的东西飘着，瓶底还是有贴壁的细胞，细胞培养基混浊，开始以为是细胞长得太多，导致接触抑制死亡，但是倒掉培养基，用PBS洗干净，把瓶内贴壁的细胞用胰酶消化分装后，第二天还是出现这种情况。有时如果传代的细胞特别少，每天给他换液，到了第三天左右，细胞数目不多，但也出现了上述的情况（很多碎片和团状物飘着），不知大家有没有遇到这种情况，帮忙分析分析。我也有同样问题，
我现在也出现了类似的情况
有可能是支原体污染
曾经做单抗铺巨噬细胞，铺好发现细胞全是会动的，跑的还挺快！！仔细一看，全是滴虫。感情这只老鼠感染了滴虫！！！！我那个郁闷阿！
太有用了,谢谢!
太好了，很全，楼主辛苦
我的细胞污染探索
某天打开孵箱，看到我的L1210的培养瓶培养液又是黄黄的，觉得很不错，今天又可以传代了，可是在镜下一看，细胞虽然明显增加了，但并没有象以前那样长满，而且更让我心惊的是怎么出现了许多黑色的小点，杆状，而且好像在动来动去，翻转，旋转，在细胞很多的地方小点就少，而在细胞较少的地方小点就多，细胞的活力也没有以前好了，第一反应细菌污染，请实验室老师过来看，说不是细菌污染，这个点要比细菌的小黑点大的多，也好象不是霉菌，没有菌丝，没有常见的团壮的生长，肯定不对劲，但到底是什么，说不上来。最后，决定换液、洗涤、离心，换瓶，操作结束后镜下看黑点几乎看不到了，有点放下心来。
隔天后去看，培养液还和上面的一样，但镜下，那种东西又出来了，在细胞少的地方，几乎呈现出粗砂粒样，我欲哭无泪，知道可能不行了，郁闷的换液后，回家上网·搜，一个名词跳了出来：黑胶虫。黑色、杆状、运动、细胞不会很快死亡，这些描述简直惊人的一致，我确定了，我受到了黑胶虫的袭击。但黑胶虫是什么，由于网上说法不一，我决定探究一下。
这是我的探究过程：首先，培养液略黄，稍有浑浊，镜下观察，细胞还没有死，但是已经不长了，那种东西已经是铺天盖地了，满眼望去，尽是粗砂粒样，细胞好像成了一个个汪洋中的小岛。
细胞涂片，送到化验室，革兰氏染色，不久电话回报怀疑－－真菌。第一反应不可能，亲自去了化验室，看到了片上一个个瓜子样的小点，染色呈黑色。看我还有些怀疑，化验室的同事又作了滴片，镜下暗视野40倍可见一个个亮白色芝麻样的东西在游来游去，再次涂片染色仍和以前一样，并且可以见到芽孢样的形状，他们确定无疑是真菌，但不是常见的念珠军、霉菌，具体是什么，也说不上来。由于已经盖棺定论，计划的HE染色、支原体没有进行。
已经将污染的细胞扔掉了。休整几天。
附照片。
1、这是未污染时的细胞
1、这是未污染时的细胞
（缩略图，点击图片链接看原图）
2、这是污染后的
（缩略图，点击图片链接看原图）
另一张
（缩略图，点击图片链接看原图）