哦,欢迎专家光临指导
那代问一下
>
在离体血管环实验中：
1，在血管收缩达到坪值时，其张力应该维持恒定，不该出现衰减。如果衰减，证明实验条件不够成熟。（比如：PSS的选择，温度，PH值，实验系统是否稳定，建议使用ADInstrumengs公司的PowerLab系统）
2，内皮源性舒张因子包括：NO，前列腺素，内皮源性超极化因子等，随着血管级别的升高，NO的比例逐渐降低，EDHF的比例升高。 也就是说，在胸主动脉环，由乙酰胆碱引起的内源性NO释放造成的舒张作用是很明显的，不用怀疑。一般0.01mmol/L时作用已经比较强了。
3，离体血管实验当中经常用舒张百分率表示舒张作用的强弱，本人建议用张力直接反应实验结果会更好，用张力的变化反应舒缩反应岂不是更好吗！
4，离体血管实验中，physiological salt solution is very important, so the stability of temperature, PH and O2 must be caution.
楼上说在开始下降时加乙酰胆碱，这本身就是错误。张力出现下降证明你的实验条件还不够成熟，张力降低时，衰减和舒张又怎么能够区分清楚呢!
这是我个人长期实验的经验，请大家提出宝贵意见。
我正准备开始做血管环的实验，用的是ADI公司的powerlab仪器，但是我发现浴槽缺少金属挂钩，打电话公司告之可以自己制作挂钩，请问你们这样的挂钩可以用什么东西来代替，一般在什么地方可以买得到
我前些天用长期糖尿病大鼠雄主动脉做了血管环试验，发现给与NA后张力曲线出现上下振颤，不像正常大鼠那样平滑，请问是什么原因造成？谢谢！
anniesu wrote:
我正准备开始做血管环的实验，用的是ADI公司的powerlab仪器，但是我发现浴槽缺少金属挂钩，打电话公司告之可以自己制作挂钩，请问你们这样的挂钩可以用什么东西来代替，一般在什么地方可以买得到
用钉书钉就可以
zhongyao28 wrote:
我前些天用长期糖尿病大鼠雄主动脉做了血管环试验，发现给与NA后张力曲线出现上下振颤，不像正常大鼠那样平滑，请问是什么原因造成？谢谢！
你所说的振颤是规律的曲线还是无规律的？
血管环挂钩用针灸针或介入用的导丝做三角形就行了
问一下dcalf：大鼠的大脑中动脉是怎么取的呀
是规律的曲线，不同的大鼠震颤幅度不同。
大鼠的大脑中动脉制备方法：
将大鼠断头后，用剪刀在颅顶做正中切口，剪开颅顶的皮肤及皮下组织，然后用骨钳将颅骨打开，完全暴露大脑皮质，然后用手术刀，沿颅底将与脑组织连接的神经切断，取出脑组织，将颅底向上放置，可以清楚看到大脑动脉交通或脑动脉环路了，剥离脑膜，取出大脑中动脉就可以了。自己试一试，很简单的。
不清楚的话，随时联系。
我找到一张大鼠脑底的图片，上传，可以作为参考
middle cerebral artery.bmp (110.16k)
我是心内专业的，要做某药对血管环张力的影响的实验，我想请教几个问题，1）我们实验室没有张力换能器，所以我要到药理系或者生理系去做，其实仪器我也不会使用，一些溶液我也没有，我只有某药和实验原理，请问如果我自己到别系教研室去通过交费什么的方式进去他们实验室做，我仪器的使用，实验的操作步骤都不会咋办啊（表笑我，以前上课没认真)?
2)我的实验主要研究某药对血管环张力的影响，我做加药时要不要加乙酰胆碱，肾上腺素之类的药呢？只加我的某药（其作用与去甲肾上腺素相似）及该药的阻断剂，还是也要加乙酰胆碱，肾上腺素等？原理?
谢谢楼主及各位兄弟姐妹的帮助！
1、仪器可以学，溶液可以自己配制，这些都不是大问题。（跟上课没多大关系，LOL!）
2、根据你的实验药物作用途径选取血管制作血管环，这里操作的关键是对血管内皮的保护，若损伤可影响实验结果。
3、作张力研究，Ach、Phe是必备的，可以帮助判断血管功能情况。只有在保证血管功能完整的前提下进行你的实验药物，方可实验成功。
楼上的仁兄，你的意思是按一般的步骤用去甲肾判断血管功能情况后，再用我的药物及阻断剂吗？
参考一下我的实验步骤：
1．2 溶液的配制
生理盐溶液( Physiological Salt Solution，PSS）,其成分为（mmol/L）：NaCl 154.7, KCl 5.4, 葡萄糖11.0, CaCl2 2.5, Triss 6.0。
60mmol/L-K+ PSS, 其成分为：NaCl 100.1, KCl 60.0, 葡萄糖 11.0, CaCl2 2.5, Triss 6.0。
Free-Ca2+ PSS, 其成分为（mmol/L）：NaCl 154.7, KCl 5.4, 葡萄糖11.0, EGTA 0.5, Triss 6.0。
无钙60mmol/L-K+ PSS, 其成分为（mmol/L）：NaCl 100.1, KCl 60.0, 葡萄糖11.0, EGTA 0.5, Triss 6.0。
上述所用各种PSS液中，KCl和NaCl配成20倍的母液，CaCl2也配成20倍母液，临用时用量筒量取所需的量。葡萄糖、EGTA和Triss临用时，用分析天平秤取所需要的量。在横温水浴锅内加热至37℃，用1mol/L的HCl将pH值调至7.4。此时用调好pH值的PSS液溶解牛磺酸、乙酰胆碱、L-NAME、CaCl2和去氧肾上腺素至所需浓度。文中所述试剂的浓度均为10ml浴槽内的终浓度。
11.4mmol/L KCl液的配制：PSS液8.9ml，再加入60mmol/L-K+ PSS 1.1ml。
17.4mmol/L KCl液的配制：PSS液7.8ml，再加入60mmol/L-K+ PSS 2.2ml。
35.4mmol/L KCl液的配制：PSS液4.5ml，再加入60mmol/L-K+ PSS 5.5ml。
牛磺酸溶液的配制：2.5g牛磺酸加PSS到20ml，牛磺酸浓度为1mol/L，在恒温浴锅内加热至37℃溶解，临用前配制。向浴管内加入牛磺酸，使其在浴管内终浓度依次为：20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L和100mmol/L。
NaCl溶液的配制：1.17g NaCl加PSS到20ml，NaCl浓度为1mol/L, 其浓度与牛磺酸溶液的摩尔浓度相同，将其作为对照，加药方法与牛磺酸相同。
1．3 仪器
自制血管平滑肌浴管实验系统、张力换能器(JH-2, 10g，高碑店市新航机电设备有限公司)、HSS-1B数字式超级恒温浴锅（成都仪器厂）、MS4000U1计算机生物信号采集分析系统（广州市龙飞达科技有限公司）、加样器（上海求精生化试剂仪器有限公司）。
1. 4 实验动物
雄性Wistar大鼠，体重240～260g，由山西医科大学实验动物中心提供，合格证号为医动字第070102。
2 方法
2.1 动脉环制备
取Wistar大鼠，脱臼，立即开胸取胸主动脉置于O2饱和的4℃ PSS液中，剔除干净周围脂肪及结缔组织后，剪成长度3～4mm的血管环四个。血管环用两根不锈钢微型挂钩贯穿血管管腔，水平悬挂在10ml浴漕内，下方固定，上方以一细钢丝连于张力换能器。经MS4000U1计算机生物信号采集分析系统记录血管的张力变化。浴管内含有通以100％O2、37℃的PSS液10 ml。每个血管环悬挂在浴管后，基础张力调至2g，平衡1h，其间不断调整张力，使之维持在2g的恒定水平，每20 min换一次营养液。所有动脉环用60mmol/L-KCl PSS液多次刺激，当标本对刺激稳定时，即连续2次同样的刺激所引起的收缩幅度差别＜5％时，开始正式实验。
2.2 去内皮血管环的制备
将修剪干净的胸主动脉环两端固定，用与血管内径相适的棉棒从管腔擦过，连续两次。血管环悬挂稳定1h后，用60mmol/L-KCl PSS液刺激，达到坪值后，加入乙酰胆碱（1×10-5mol/L）。舒张幅度不超过收缩幅度的5％时，认为内皮去除完全，可以开始实验。内皮完整时，乙酰胆碱（1×10-5mol/L）的舒张幅度可达到100％。
2.3 在基础状态下，牛磺酸对大鼠胸主动脉环张力的影响
四个血管环分别置于1、2、3、4号浴漕内。 1号和2号为牛磺酸组，累积加入20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L、100mmol/L和120mmol/L的牛磺酸；3号和4号为NaCl组，累积加入相同摩尔浓度的NaCl，以排除渗透压增大对实验结果的影响。加药的时间间隔，以牛磺酸组每次加药后血管张力达坪值后，才开始加下一个浓度。一轮实验完成后，用PSS液连续冲洗三次，再每15min冲洗一次，直到血管环张力恢复到实验前的基础水平才可以开始下一轮实验。
2.4 牛磺酸对PE和KCl预收缩的血管环张力的影响
牛磺酸组和NaCl对照组一次性加入1μmol/L PE或60mmol/L KCl，达到坪值后，牛磺酸组累积加入20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L、80mmol/L和100mmol/L的牛磺酸；NaCl对照组累积加入相同摩尔浓度的NaCl。
2.5 牛磺酸对不同浓度KCl和 PE诱发收缩的影响
用11.4mmol/L KCl预收缩血管环，收缩达坪值后，加入60mmol/L的牛磺酸，血管环进一步收缩，再次达坪值后，用PSS液连续冲洗三次，每隔15min冲洗一次，直到张力回到基线水平。同样，观察60mmol/L牛磺酸对17.4mmol/L、35.4mmol/L KCl诱发收缩的影响。
与上述方法相同，观察60mmol牛磺酸对1.0×10-8mol/L、1.5×10-8mol/L、2.0×10-8mol/L和1.0×10-6mol/L PE诱发收缩的影响。
2.6 在Free-Ca2+ PSS液中，牛磺酸对Ca2+和PE诱发收缩的影响
在PSS中用60mmol/L-K+ PSS检测血管反应性，用Free-Ca2+ PSS连续冲洗四次，每隔15min冲洗一次，适当调节张力，直到血管环张力稳定在2g。将浴槽内液换为无钙60mmol/L-K+ PSS，牛磺酸组加入80mmol牛磺酸，NaCl对照组加入80mmol/L NaCl，温育10min，牛磺酸组和NaCl对照组同时加入3.0mmol/L CaCl2，观察两组血管环张力的变化幅度。
同上，将浴漕内液换为 Free-Ca2+ PSS，基础张力稳定在2g。牛磺酸组加入80mmol牛磺酸，NaCl对照组加入80mmol/L NaCl，温育10min后，牛磺酸组和NaCl组同时加入1.0μmol/L PE，观察两组血管环张力的变化幅度。
2.7 L-NAME和内皮对牛磺酸作用的影响
L-NAME组和对照组一次性加入1μmol/L PE，达到坪值后，L-NAME组加入0.1mmol/L L-NAME，由于L-NAME此时可进一步收缩血管环，因此，等再次达到坪值后，L-NAME组和对照组同时加入40mmol/L牛磺酸。L-NAME组和对照组舒张分别达到最大幅度时，用PSS液连续冲洗三次，然后每隔15min冲洗一次，直到血管环张力回到基线水平，才可以开始下一轮的实验。
去内皮组和内皮完整组同时一次性加入1μmol/L PE，达坪值后，分别累积加入牛磺酸20mmol/L、40mmol/L、60mmol/L和80mmol/L。去内皮组和内皮完整组都以内皮完整组由1μmol/L PE诱发的收缩幅度作为100％，比较两组舒张幅度的差异。
2.3 统计方法
牛磺酸的舒张作用以60mmol/L KCl或1μmol/L PE诱发的收缩幅度作为100％，求出给相应各浓度的受试药物后的舒张百分率。其余数据均采用血管环张力变化反映药物作用，单位为g。结果均以 表示，用两样本t检验进行显著性差异检验。用GrahPad Prism4.0对数据进行Logistic曲线拟合并根据Equation 1求得EC50和最大效应（Emax），再计算出抑制率为20％的牛磺酸浓度（IC20）。
非常感谢楼主朋友，你的资料很详细，对我很有用，我有几个小问题想请教：1.我看过好多人用克氏液，楼主你用的是PSS，二个有啥区别？
2.你加牛磺酸的间隔时间是多久？
我是个初学者，很多东西不懂，我先咀嚼你的资料，可能以后还要问你问题哦，有劳各位了！
首先明确营养液的条件是什么？
营养液必须满足：离子成分，缓冲对，温度，PH值，氧气等，只要这些条件满足了基本的生理条件，离体组织就能存活。这就是离体实验的本质所在，不信自己设计个配方，只要满足上述条件，组织肯定就可以存活。据大多数人的经验，克氏液多用离体肠道平滑肌实验，langandoff实验和工作心。对于PSS就是Physiological Salt Solution即生理盐溶液的简称，也就是说所有做离体实验用的营养液都可以称PSS。
关于加药的 时间间隔，我认为要视情况而定，如果药物起效快，当然间隔时间短，反之亦然。由于牛磺酸起效慢，所以我选择加药间隔时间是10分钟。
我的做离体实验的经验是，一定要严格。提出关键两条：1，用水银温度计测试浴漕内温度，必须满足37摄氏度。国内的好多恒温泵都不太准确的。2，调营养液PH值时，时间尽量长点，建议在温育至37摄氏度时，调PH值到7.40。要知道温度是影响PH值的。
同时，也希望能和大家多交流。
我取出的血管环总是对NE没有反应，这是怎么回事？哪位可以列举出实验中影响血管环活性的因素及注意事项？
另外弱弱的问一句：取下的血管是不是要在通氧的，4度的克氏液中作进一步处理？如果是这样，很难保证克氏液一直是4度，因为在室温下溶液温度会上升，也不太方便一直通氧（至少在冰箱内保存血管的时候是不可能通氧的），关于这个问题各位是怎么做的？
ggwon wrote:
楼上的仁兄，你的意思是按一般的步骤用去甲肾判断血管功能情况后，再用我的药物及阻断剂吗？
去甲肾上腺素用来检测标本活性，加药后收缩幅度小于2g者血管没有活性，应弃去不用。
用去甲肾上腺素使血管收缩呈最大反应，待稳定后加入乙酰胆碱观测舒张幅度，以此检测内皮完整与否。若加入Ach后舒张幅度达80%，则视为内皮完整，不产生舒张或舒张幅度小于10%，则视为去内皮成功。
anniesu你好！看看我以下建议如何.
我认为什么取出的新鲜胸主动脉放入4摄氏度通氧的PSS中，都不重要。我取的血管放入盛有PSS的培养皿中放在冰箱4摄氏度保存2天都没有问题，活性仍然较好。至于你取的血管对NE老是没有反应，我提几点改进意见：
1，对NE没有反应，那么对phenylephine(1μmol/L), potassium chloride(60mmol/L)有没有反应。如果有那就是你的NE失效了。
2，如果对所有收缩剂都没有反应，那么我认为你的营养液很可能有问题。你可以采取如下措施，对你的PH计重新定标，测PH值时，营养液PH值必须在37摄氏度10分钟内比较稳定（7.40）。而用于分离血管用的营养液在室温下，将其PH调至7.40，专门用于分离血管用。
3，在实验系统稳定情况下，用水银温度计测浴漕内温度到底是不是37摄氏度 。
4，前负荷最好不要超过2g，要缓慢将前负荷调至设定的前负荷。
5，NE见光容易分解，久置易氧化失效，我建议最好临用前配制，或改用phenglephine,其性质比较稳定。
如果还不行，我可以上门指导！哈哈哈！
先谢谢dcalf朋友，你对实验要求很过细，严谨，佩服！
大家好，小妹也是做血管环的新手，由于最近刚刚开始做一周，感觉空白老鼠的结果很不稳定对于ACH等药物的反应性相差甚远，甚至用SNP10的－8次方后，舒张程度超过了100％，不知道这是由什么原因造成的，我用的前负荷是1G,用的甲氧胺刺激，收缩的程度0.4到0.8g不等。
此外甲氧胺，ACH等药物是师姐1年前配置的，不知道结果的不稳定是不是和药物有关，药物还可以再继续使用下去么？
由于时间比较紧急，不知道哪里可以迅速买到苯肾上腺素，及ACH等药物，我在武汉，已经问过各大医院和同济医学院的基础医学院都没有。
你做的是大鼠的胸主动脉环吧！
如果是，成年鼠（220-280g）其收缩幅度应该维持在2g左右，你的收缩幅度那么小，收缩达到坪值后，张力能维持多长时间，应该是不会自然衰减的。所以我认为条件不行。不知你的用的乙酰胆碱是氯化的还是溴化，如果是溴化乙酰胆碱，其是很不稳定的，药效维持一个月应该没有问题，时间长了很难保证。
至于phenylephine and ACh, Phenylephine 你可以去当地的药品采购中心，也就是药材公司购买应该有的，也不贵的，几十块钱吧！乙酰胆碱可以去sigma公司买，如果着急用的话，可以去你们学校的机能实验室借点，他们肯定有了，因为这是常用的药物。
如果实在没有办法，请联系 dcalf@163.com
楼主及各们做血管环的朋友好，以下是我写的实验计划，请楼主及各位帮我看看，根据经验有哪些地方不妥的，
一， 配制 克氏液：NaCl 6.9g, KCl 0.35g, 葡萄糖2.0, CaCl2 0.28g,MgCL2 0.29g,kH2po4 0.16g,NaHCO3 2.0g,溶于1000ml双蒸水中
二，血管环的制备
血管环宽度3mm，四条，基础张力2g，平衡90分钟，在实验之前，在各槽中加入终浓度为10（-7）mol/l的phe,以收缩张力达0.8g为判断血管环有无损伤的标准。（我的实验对内皮是否完整没有要求）
三，实验步骤
1，
1，2号浴槽为药物组（药物作用与phe相似），3，4号浴曹为phe组
分别在二组浴槽中加入累积浓度为10-11，10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/l的药物和phe(因为第一次做这个药，不知其产生作用的浓度，所以做的浓度梯度较多，不知对否），制成累积浓度--收缩反应曲线。克氏液连续洗三次，再每隔15分钟洗一次，血管张力恢复到实验前的基础水平 ，以上实验步骤重复做6次。再开始下一轮实验。
2，
分别在四个浴槽中加入 浓度为10-9，10-8，10-7，10-6，10-5mol/l的哌唑嗪，作用2分钟后，再加入10（-8）mol/l的某药，观察不同浓度哌唑嗪对某药收缩血管效应的影响。第二步重复做6次。
我有几个问题：1，整个实验过程大概需要多少克氏液，因为我是在别个实验室去做，配液体不方便嘛要先配好
2，浴槽是10ml，那么终浓度10(-11),要求加进浴槽前药的浓度是几多？
3，我设计的这个实验好像只用到三种药，phe,哌唑嗪，还有我要研究的药，请问下你们所用的phe,哌唑嗪是什么规格的，是不是一般的临床用的药。
谢谢指教！
建议：
1，先做预实验再设计实验。
2，必须查看尽量多血管环方面的文章，最好是国外的。
3，我认为克氏液做离体血管实验并不是特别好.请仔细阅读我的帖子。
楼主你用的PSS液体中的Triss 6.0是什么？我从来没听过，在哪买的呀？
谢谢楼主的解答和帮助！
我做的就是大鼠的胸主动脉血管环，按照师姐的经验，给1g的前负荷后平衡，在平衡的过程中，血管可以自动舒张到0.5g甚至更低，不知道这种现象是否正常，有老师建议我当舒张太低的时候可以在平衡的同时再增加前负荷，使其维持在0.8g左右，不知道这种方法可行否。另外请问一下楼主，大鼠的前负荷应该给多少比较合理？
此外今天的试验中，给甲氧明刺激后收缩到0.8g，但是维持不了几分钟就开始下降，并且图形波动的范围比较大，请问楼主这是否就是因为收缩幅度幅度太小所导致的，而这个原因的产生是血管受损还是我药物本身的问题，此外你说的条件不行包括哪些方面？
不胜感激！
补充说明一下，我们的空白SD大鼠只有170g左右，上面说错了，甲氧明刺激后最后最大收缩了0.9g(不是收缩到0.8g),刺激后图形有下降趋势，曲线出现上下振颤，且有规律，希望楼主给予解答，谢谢！
you may use noradrenaline or phenylephrine to contract the thoracic aortic rings, it is true that I even didn't use methoxamine . you also may pretreat the rings in L-NAME(-4) and indomethacin(-4), I think it should remove the autorhythmicity.
I can't give you more advice because I don't know the scheme of your experiment.
I am glad to help you, welcome your question!
同志们最近忙什么了？最近好像比较冷清啊！
首先对dcalf战友的热心帮忙表示感谢
但是我并不认同kerbs液不适合做离体血管条实验
偶实验室采用法国EMKA的成套离体张力仪器，只要PH值和温度控制好了，用Kerbs液完全没有问题
当然用PSS也很多
不管用什么液体，只要实验能做好是最重要的。
希望大家都来谈谈自己的经验，只要能使新手少走弯路，顺利完成实验，使这儿成为大家交流的地方，我就很高兴了!
我做胸主动脉对Ach一直都没反应,对NE,Phe,反应都不错,Ach是新配的,温度是37左右,试了PH,快到8了,按说我的K-H,也是根据文献配的,毕业的师兄师姐也是这样做的,那要怎么调PH?请指点迷津,谢谢.
60mml/L的KCl溶液怎么配？
KCl分子量为74.55，浴槽内有生理溶液10mL，我算出来的是称取4.473g的KCl溶解到lml生理溶液中，向浴槽内滴加0.01ml，这样终浓度即为60mml/L，但1ml水里溶解不了4.473gKCl，请问我的问题出在哪，各位是怎么做的？
anniesu wrote:
我正准备开始做血管环的实验，用的是ADI公司的powerlab仪器，但是我发现浴槽缺少金属挂钩，打电话公司告之可以自己制作挂钩，请问你们这样的挂钩可以用什么东西来代替，一般在什么地方可以买得到
澳大利亚的powerlab生理信号记录仪是心血管信号记录方面可以说最佳的仪器，至于血管方面的专用仪器，有16道和8到以及四道记录仪。如果你用的是2002年以后的新产品，它是不用挂钩的。他们的浴槽采用的1ml设计，固定位置采用平面固定，不存在老式的上下式固定，从一定程度上消除了由于血管本身重量所造成张力变化的系统误差。
这种挂钩一般很细，要求必须足够细，而且足够硬在1g左右的力下不会发生弹性形变，能够满足这种要求的只有一个，那就是心内的介入治疗用的心导管的导丝。可将外科剥离，将间断大约3cm长最细的部位取下，制备待用。
zhongyao28 wrote:
我前些天用长期糖尿病大鼠雄主动脉做了血管环试验，发现给与NA后张力曲线出现上下振颤，不像正常大鼠那样平滑，请问是什么原因造成？谢谢！
血管振颤，不外几个原因。
1：信号祯数过高，频率过快。可以降低信号采集速度，并降低走纸速度（即时间描记的刻度，横坐标位置）。
2：血管活性不佳，出现抽搐振颤现象。
3：营养液（如KH液和krebs液）中含有的kcl浓度可能过高。应充分预冷，混合气体充分饱和，并稳定2小时后开始实验，可大幅度提高准确性。