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【求助】第一次使用正相硅胶柱,请教大家!

第一次使用正相硅胶柱(因为买不起反相),想分离自己的大极性样品(样品可以溶解于甲醇),跑薄层板时用氯仿:甲醇:乙酸=5ml:1ml:2滴,跑出很清晰的一排斑点,但目的物在原点,跑上去的都是没有活性的杂质,所以突发其想,打算上硅胶柱,先用氯仿甲醇把极性小的杂质冲下来,然后柱子顶端的冲不下来的物质就是自己想要的东西了,这时再想办法回收样品,比如把顶端物质挑出来用甲醇或水来溶解,请问这种做法是否可行?

但是今天问了一些同学,他们说大极性的物质不宜用普通的硅胶来做,他们冲硅胶柱通常是用石油醚、乙酸乙脂、氯仿这些小极性的有机溶剂,即使用甲醇都会用很小比例,说如果用比例比较高的甲醇的话,会把硅胶给溶了,这样就会引入新的杂质。

困惑中,向大家请教解决的方案,因为我到目前都没有了解目的物属于哪一类物质,只有一步步除去没活性的杂质。非常感谢!
氯仿:甲醇:水 试试,一般是7:3:1,不行的话再找个合适的比例
你的柱子棉花如果塞的好的话,硅胶是不会出来的!你说把样品挑出来用甲醇溶,我觉得这样很不好因为硅胶回溶进去!其实氯仿比甲醇是经典展开剂从100:1到1:1都可以!你先走个硅胶柱子粗分一下吧!其实反向硅胶的效果未必就好(除了极性超大的).
如果有什么问题咱们可以交流一下!我的邮箱是fengji163@163.com
想要分到够打谱的纯度,一般硅胶柱就够了,大不了再用凝胶过下。如果你有凝胶的话,建议你先以氯仿:甲醇:乙酸梯度洗脱初步分离一下(逐步加大甲醇比例),最后过一下凝胶顺便除下硅胶残留物就可以了,即使不除,在氢谱上还是比较好区分哪些峰是硅胶上带入的。
我 建议你去问一下 管理员,这样问题就好比较好 解决了!
请问一下同行的 关于药剂学这一科目的 最好 的 学习方法 是 ?
buqicao“想要分到够打谱的纯度,一般硅胶柱就够了,大不了再用凝胶过下。如果你有凝胶的话,建议你先以氯仿:甲醇:乙酸梯度洗脱初步分离一下(逐步加大甲醇比例),最后过一下凝胶顺便除下硅胶残留物就可以了,即使不除,在氢谱上还是比较好区分哪些峰是硅胶上带入的。 ”我想问下,如果在流动相里加了醋酸,那么在回收浓缩时残留的醋酸会不会使样品降解掉??还是在回收前要调PH?
非常感谢楼上的朋友们!

其实我的问题就是,如果用极性大的溶剂去冲硅胶柱,会导致硅胶也溶于这些大极性的溶剂,这样会和自己需要的目的物一起下来,不就等于引入了新的杂质了吗?

我们这里的同学一般都用90体积的氯仿比几体积的甲醇作为洗脱剂,都没有用过大比例的甲醇去冲洗的,更不要说洗脱剂里有水、有酸了,这就是我有所顾虑的地方。
其实倒不是怕目的物留在柱子顶端冲洗不下来,待我把杂质给全部冲下来,再加大洗脱剂的极性,大不了加一定的酸和水,我想一定能冲下来的,怕的只是洗脱剂把硅胶也溶解了而已

staray1990提的问题也值得考虑,因为有时不得不依靠有机酸;但是如果有酸的话,回收样品就变得困难了
rositaleung 以前写过:
“之前我做过几个月的皂苷分离,亦是正丁醇部位的硅胶柱。因为一开始亦是毫无头绪,所以唯有多配几个梯度的流动相。
A. 氯仿:甲醇:水 = 9:1:0.1
B. 氯仿:甲醇:水 = 8:2:0.2
C. 氯仿:甲醇:水 = 7:3:0.5
D. 氯仿:甲醇:水 = 6:4:1

冲柱的过程是:100% A --> 50%A + 50%B -->100% B --> 50%B + 50% C-->
100% C --> 50%C + 50% D --> 100% D
虽然看似很复杂,但这样的梯度比较仔细。若上样量不多,很快也可完成。根据我的经验,一般洗到100% C已经可以。但也试过因为上样太多,很不幸地要冲到5:5:2。
A至D四个solvents亦可同时做TLC的展开剂。”
我也正在做大极性黄酮的分离,打算用他的方法试一下,希望对你有所帮助
就算你的甲醇加大也不会有杂质,如果有你可以上个葡聚糖就可以搞定

应该在回收溶剂前调好PH,否则回收过程中酸性增强,再加上在加热,很可能会引起降解
其实要看你的样品量了,如果样品量较大的话就完全不要担心会带入少量的硅胶溶出物,即使有,所占比例也相当小。我一般系统分离时,梯度都要洗到氯仿:甲醇=1:1呢,相比于样品量来讲,那点杂质实在不算什么,况且还有后续分离呢。
. 氯仿:甲醇:水 = 9:1:0.1
B. 氯仿:甲醇:水 = 8:2:0.2
C. 氯仿:甲醇:水 = 7:3:0.5
D. 氯仿:甲醇:水 = 6:4:1
这样的比例源于何处?谢谢
谢谢大家了!

fengji wrote:
就算你的甲醇加大也不会有杂质,如果有你可以上个葡聚糖就可以搞定



就是说少量的硅胶可以通过分子筛除去?那么请问用哪种分子筛可以除去啊?
我说葡聚糖凝胶就行,它就是分子塞原理!比如说LH-20
好好,多谢:)

通过这个求助帖,得到了很多有用的帮助,真的非常长见识!
可以做到水相比例到5%,但最好在1%之内,这样对柱子的损伤较小,但对样品的污染还是很小的。

可以用ELSD或MS来做检测器,就可以把脱落的硅胶检测到的。如果担心有脱落就试试这种检测器,就行了。

我做过硅胶正相色谱最高水的比例到3%的,用的是ELSD检测器,没看到什么的鬼峰,一切正常。
收获不小啊,谢谢大家
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