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建立高效的crispr/cas9编辑技术

2018-03-02 09:31

CRISPR/Cas9是一项革命性的基因编辑技术,得到广泛应用。我们从两个方面着手提高CRISPR/Cas9的编辑效率。我们利用附着体载体表达Cas9和gRNA,称之为epiCRISPR技术。附着体载体不整合到基因组,但是可以随着细胞的分裂而复制,因而可以长期的表达外源基因,实现长期的基因编辑。同时在附着体载体上表达嘌呤霉素抗性基因,可以富集转染成功的细胞。编辑完成后撤除筛选药物,附着体质粒迅速丢失,编辑后的细胞不再表达外源基因。利用附着体技术可以实现高达100%编辑效率,还可以高效的敲除基因组大片段,以及同时敲除多个基因。CRISPR/Cas9编辑效率受gRNA序列影响,不同的gRNA效率差别很大,测试gRNA效率费时费力。我们建立了高通量的测试gRNA活性的方法,得到了5万多条gRNA的活性,覆盖了2万多个人类基因。这些工作将会极大的方便基因编辑工作。