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染色显微镜检查的实验步骤及注意事项有哪些?

2020-05-13 10:15 医学教育网
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染色显微镜检查的实验步骤及注意事项有哪些?为了帮助大家了解,医学教育网小编为您提供汇总:

实验步骤

(1)取干净的载玻片,用记号笔在其一面做好正反面标记,再在载玻片另一面中央滴上一小滴蒸馏水。

(2)将接种环在火焰上灭菌,待冷却后,在酒精灯旁从标记的单个小菌落中取少许细菌置于蒸馏水中混匀(同时盖好平板倒扣置于一旁),用接种环涂成直径约1.5cm的菌膜,再在酒精灯火焰上方以钟摆速度通过固定好细菌,待冷却进行染色。

(3)先滴加草酸结晶紫溶液染色1——2min,再水洗;然后滴加革兰氏碘液溶液染色1——2min,再水洗;随后滴加95%的酒精脱色30——60s,再水洗;最后滴加稀释的品红进行复染30——60s,再水洗;待干燥或吸水纸吸干后镜检。

(4)将干燥的载玻片放在1000倍油镜下,滴加一滴松柏油进行镜检,观察其形态特征,判断细菌的种属 。

注意事项

标本涂片不能太厚,若涂片较厚,应延长脱色时间,直至不在出现紫色为止。染色过程中勿使染色液干涸。用水冲洗后,应吸去玻片上的残水。革兰氏染色成败的关键是脱色时间。如脱色过度,革兰氏阳性菌也可被脱色而染成阴性菌;如脱色时间过短,革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性菌。脱色时间的长短还受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影响 。

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