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蛋白质的分离纯化(药师生物化学辅导精华)

2010-03-27 17:06 医学教育网
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  蛋白质分离纯化的方法主要有:盐析、透析、超离心、电泳、离子交换层析、分子筛层析等方法。

  1.盐析是应用中性盐加入蛋白质溶液,使蛋白聚集而沉淀。

  2.透析方法是利用仅能通透小分子化合物的半透膜,使大分子蛋白质和小分子化合物分离,达到浓缩蛋白质或去除盐类小分子的目的。

  3.超离心蛋白质为胶体颗粒,在离心力作用下,可沉降。由于蛋白质其密度与形态各不相同,可以应用超离心法将各种不同密度的蛋白质加以分离。

  4.电泳蛋白质在一定的pH溶液中可带有电荷,成为带电颗粒,在电场中向相反的电极方向泳动。由于蛋白质的分子量和电荷量不同,其在电场中的泳动速率也不同,从而将蛋白质分离成泳动速率快慢不等的条带。

  5.离子交换层析蛋白质是两性电解质,在一定的pH溶液中,可解离成带电荷的胶体颗粒,可与层析柱内离子交换树脂颗粒表面的相反电荷相吸引,然后用盐溶液洗脱,带电量小的蛋白质先被洗脱,随着盐浓度增加,带电量多的也被洗脱,分部收集洗脱的蛋白质溶液,达到分离蛋白质的目的。

  6.分子筛是根据蛋白质颗粒大小而进行分离的一种方法。医学教育网|收集整理层析柱内填充着带有小孔的颗粒,小分子蛋白质进入颗粒,而大分子蛋白则不能,因此不同大小的蛋白质在层析柱内的滞留时间不同,流出层析柱的先后不同,可将蛋白质按分子大小而分离。

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