Ames试验是一种广泛应用于检测化学物质是否具有致突变性的方法,它以细菌为实验材料,通过观察化学物质对细菌的遗传物质的影响来判断该物质是否有潜在的致突变性。具体操作步骤如下:
首先,选择合适的测试菌株。通常使用的是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的一些特定突变体,这些菌株在没有组氨酸的情况下无法生长,但当它们接触到可以引起回复突变的化学物质时,则有可能恢复其合成组氨酸的能力。
接着,准备样品和对照。将待测化学物质溶解于适当的溶剂中,同时设置阴性对照(不加任何处理)以及阳性对照(加入已知致突变物),以确保实验结果的有效性和准确性。
然后,在无菌条件下进行混合。取适量的测试菌株与营养肉汤、琼脂和不同浓度的样品溶液均匀混合后,立即倒在含有适量组氨酸和生物素的固体培养基平板上,并轻轻摇晃使混合液分布均匀。
之后,将平板置于37°C恒温箱中孵育48小时。在此期间,如果待测物质具有致突变性,则能诱导细菌发生回复突变,使其在缺乏组氨酸的情况下也能生长形成菌落。
最后,观察并记录结果。根据平板上出现的菌落数量来判断样品是否具有致突变作用。一般而言,与阴性对照相比,阳性对照和样品处理组中应显示出显著增加的菌落数目,这表明该化学物质可能具有致突变性。
需要注意的是,在实际操作过程中还需要考虑其他因素如实验条件、数据统计分析等,以确保结果的真实性和可靠性。
首先,选择合适的测试菌株。通常使用的是鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)的一些特定突变体,这些菌株在没有组氨酸的情况下无法生长,但当它们接触到可以引起回复突变的化学物质时,则有可能恢复其合成组氨酸的能力。
接着,准备样品和对照。将待测化学物质溶解于适当的溶剂中,同时设置阴性对照(不加任何处理)以及阳性对照(加入已知致突变物),以确保实验结果的有效性和准确性。
然后,在无菌条件下进行混合。取适量的测试菌株与营养肉汤、琼脂和不同浓度的样品溶液均匀混合后,立即倒在含有适量组氨酸和生物素的固体培养基平板上,并轻轻摇晃使混合液分布均匀。
之后,将平板置于37°C恒温箱中孵育48小时。在此期间,如果待测物质具有致突变性,则能诱导细菌发生回复突变,使其在缺乏组氨酸的情况下也能生长形成菌落。
最后,观察并记录结果。根据平板上出现的菌落数量来判断样品是否具有致突变作用。一般而言,与阴性对照相比,阳性对照和样品处理组中应显示出显著增加的菌落数目,这表明该化学物质可能具有致突变性。
需要注意的是,在实际操作过程中还需要考虑其他因素如实验条件、数据统计分析等,以确保结果的真实性和可靠性。

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