化学灭菌法系指用化学药品来杀灭微生物的方法。同一种化学药品在低浓度时呈现抑菌作用，而在高浓度时则能起杀菌作用。其杀菌机理可能是：能使微生物蛋白质变性死亡，或与酶系统结合影响代谢，或改变膜壁通透性使微生物死亡等。常用的方法有消毒剂消毒法和化学气体灭菌法等。

　　1.浸泡和表面消毒法

　　消毒是指杀死病原微生物的方法。但化学消毒剂大多仅能杀死微生物的繁殖体而不能杀死芽孢，能控制一定范围的无菌状态。可将消毒剂配成适宜浓度，采用喷淋、涂擦或浸泡等方法对物料、环境、器具等进行消毒。常用的化学消毒剂有0.1%～0.2%洁尔灭、新洁尔灭溶液、2%～5%的酚或煤酚皂溶液、75%乙醇等。常用于物体表面灭菌医`学敎育网搜`集整理。但要注意其浓度不要过高，以防止化学腐蚀作用。

　　2.气体灭菌法

　　系指利用能形成气体或产生蒸气的化学药品达到灭菌目的的方法。

　　（1）环氧乙烷灭菌法 环氧乙烷室温下为气体，其分子作用于菌体后，能与菌体蛋白、核酸和酶中的-COOH、-NH₂、-SH等基团起反应，而使菌体死亡。环氧乙烷分子易穿透塑料、纸板或固体粉末，因此可用于塑料包装的原料粉末、散剂、颗粒等固体药料及其他固体器具的灭菌。环氧乙烷具有可燃性，与空气混合时，当空气含量达3.0%（V／V）即可爆炸，应用时需用二氧化碳或氟里昂稀释。环氧乙烷对皮肤、眼、黏膜有损害，可产生水疱或结膜炎，应用时应注意防护。

　　（2）蒸气熏蒸灭菌法 采用甲醛、丙二醇或乳酸等化学品，通过加热产生蒸气进行空气环境灭菌。