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多肽链分离的化学处理-公卫执业医师考试辅导精华

2015-02-06 16:16 来源:
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蛋白质分子多肽链的化学处理是公卫执业医师考试可能涉及到的知识点,医学教育网小编整理了相关知识点,供考生参考。  

蛋白质分子多肽链的连接有共价结合和非共价结合两种。要拆开以共价结合的-S-S-连接的多肽链,必须采用的化学处理方法常有:

①过甲酸氧化

用氧化剂过甲酸断裂-S-S-.这个反应一般在0℃下进行2小时左右,两个S就全部能转变成磺酸基,这样被氧化的半胱氨酸称为磺基丙氨酸。

如果蛋白质分子中同时存在半胱胺酸,那么也会被氧化成磺基丙氨酸。此外甲硫氨酸和色氨酸也可被氧化,从而增加分析的复杂性。

②巯基乙醇还原

利用还原剂巯基乙醇亦可使蛋白质的-S-S-断裂。当高浓度的巯基乙醇在pH8?条件下室温保温几小时后,可以使-S-S-定量还原为桽H.与此同时反应系统中还需要有8摩尔脲或6摩尔盐酸胍使蛋白质变性,多肽链松散成为无规则的构型,此时还原剂就可作用于-S-S-.此反应是可逆的,因此要使反应完全医`学教育网整理,疏基乙醇的浓度必需在0.1-0.5摩尔。

③Cleland试剂的还原作用

Cleland′s指出二硫赤苏糖醇(dithioerythriotol)及二硫苏糖醇(dithiothriotol)在氧化还原能力上是比较强的试剂,只要0.01摩尔就能使蛋白质的-S-S-还原,反应基本与疏基乙醇相似,且在许多球蛋白反应中,可以不用变性剂。

Cleland试剂首先与蛋白质-S-S-形成中间物,反应终了,还原剂被氧化形成一个稳定的六环化合物,医学教育网搜集|整理蛋白质则被还原。

还原蛋白不稳定,SH基极易氧化重新生成-S-S-键。稳定SH基的方法有:

(A)烷基化试剂使SH基转变为稳定的硫醚衍生物。

如果碘代乙酰胺代替碘代乙酸,其产物S羧氨甲基衍生物不带电荷,磺代乙酸也可与组氨酸、蛋氨酸和赖氨酸发生反应,但反应条件不同,可通过各种pH及反应时间进行控制。

(B)氨乙基化

蛋白质分子的几条肽链若以非共价健结合,则用尿素、盐酸胍等变性剂即可拆开。蛋白质的多肽链被拆开后,将它分离纯化,一般多用凝胶过滤、离子交换、电泳等方法,兹不赘述。

分离纯化后的每条肽链还要进一步分析其末端。

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