间接ELISA（酶联免疫吸附试验）是一种常用的免疫测定方法，主要用于检测血清或其他体液中的抗体。其基本原理是利用固相载体上包被的抗原与待测样本中相应的特异性抗体结合，再通过标记有酶的二抗来放大信号，最后通过显色反应来定性或定量地分析目标抗体的存在与否及其含量。间接ELISA检测步骤通常包括以下几个环节：
1. 包被：将已知抗原稀释至适宜浓度后加入到微孔板中，在37℃温育一定时间（如2小时），使抗原吸附于微孔表面形成固相化抗原。
2. 封闭：用含有蛋白的缓冲液（如5%脱脂奶粉溶液）覆盖所有未被抗原占据的位置，以减少非特异性结合。通常在37℃下温育1-2小时。
3. 加样：将待测样品加入到已封闭处理过的微孔板中，于37℃孵育一段时间（如1小时），让样本中的抗体与固相化抗原发生特异性结合。
4. 洗涤：使用PBS或TBS缓冲液清洗微孔板以去除未结合的物质及非特异吸附物，一般需要洗涤3-5次。
5. 加入酶标二抗：向每个孔中加入适当稀释度的酶标记二抗（如HRP标记羊抗人IgG），37℃孵育1小时。此步骤中的二抗能够与样本中存在的特异性抗体结合，并带有可以催化底物显色的酶。
6. 再次洗涤：重复第4步的操作，彻底清除未结合的酶标二抗。
7. 显色反应：向每个孔中加入适量的底物溶液（如TMB），37℃避光孵育一定时间后观察颜色变化。抗体-酶复合体催化底物产生颜色变化，通过比色法测定吸光度值来判断样品中目标抗体的存在及浓度。
8. 终止反应：向每个孔加入终止液（如2M硫酸）以停止显色过程，并记录各孔的OD值。
9. 数据分析：根据标准曲线计算待测样本中的抗体浓度。通常会设立阴性对照、阳性对照以及空白对照，以便校正和验证实验结果的有效性和准确性。

以上即为间接