分离厌氧菌时需要注意多个要点，以确保能准确有效地从标本中分离出厌氧菌。

首先是标本的采集和运送。标本采集时要避免正常菌群的污染，尽量从感染的深部组织或无菌部位获取标本，比如在进行脓肿穿刺时要严格消毒皮肤，防止皮肤表面的正常菌群混入标本。对于开放性伤口，应先清除表面的污染物，再采集深部组织。标本采集后要尽快送检，因为厌氧菌对氧敏感，长时间暴露在空气中会导致其死亡。运送过程中要保证标本处于无氧环境，可以使用专门的厌氧标本运送瓶，瓶内充满无氧气体，如氮气、二氧化碳等，并且加入还原剂以维持无氧状态。

其次是培养环境的准备。培养厌氧菌需要创造无氧的培养环境，常用的方法有厌氧罐法、厌氧袋法和厌氧手套箱法等。厌氧罐和厌氧袋需要使用化学产气袋或催化剂来消耗氧气，产生二氧化碳和氢气，形成无氧环境。在使用前要检查其密封性，确保无氧环境的稳定性。厌氧手套箱则是一个完全密闭的系统，通过通入氮气和氢气等气体来维持无氧状态，操作时要在手套箱内进行，避免外界空气进入。培养环境的温度和湿度也要控制在合适的范围，一般温度为35 - 37℃，湿度保持在70% - 80%。

再者是培养基的选择。要选择适合厌氧菌生长的培养基，常用的有硫乙醇酸盐肉汤、庖肉培养基等。这些培养基中含有还原剂，如硫乙醇酸钠，可以降低培养基中的氧化还原电位，有利于厌氧菌的生长。同时，培养基要新鲜配制，避免长时间放置导致氧化。在接种标本前，要将培养基预还原，即在无氧环境中放置一段时间，使其达到无氧状态。

另外，在接种和培养过程中也要注意操作规范。接种时要在无氧环境下进行，避免标本暴露在空气中。培养时间要足够长，一般需要2 - 3天甚至更长时间，因为厌氧菌生长相对缓慢。培养过程中要定期观察菌落的生长情况，注意菌落的形态、大小、颜色等特征。

最后，在鉴定厌氧菌时，要结合菌落特征、染色镜检、生化反应等多种方法进行综合判断。生化反应可以使用专门的厌氧菌鉴定试剂盒，通过检测厌氧菌对不同底物的代谢能力来确定其种类。同时，要注意与其他细菌