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革兰染色步骤是什么?

2026-05-10 06:41 来源:正保医学教育网
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革兰染色是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法,通过该染色法可将细菌分为革兰阳性菌和革兰阴性菌,其具体步骤如下:

首先是制片。取一块干净的载玻片,在载玻片中央滴一小滴生理盐水,用接种环挑取少量待检细菌培养物,均匀地涂布在生理盐水中,涂成直径约1cm大小的菌膜。然后让涂片在空气中自然干燥,干燥后将涂片通过火焰2 - 3次进行固定,固定的目的是使细菌附着在载玻片上,同时杀死细菌,改变细菌对染料的通透性。

接着进行初染。在已固定的涂片上滴加结晶紫染液,覆盖菌膜,染色1分钟,之后用细水流轻轻冲洗,将多余的染液洗去,甩净载玻片上的水分。结晶紫是一种碱性染料,能使所有细菌都染成紫色。

之后是媒染。滴加卢戈碘液,覆盖菌膜,作用1分钟,同样用细水流冲洗,甩干。卢戈碘液作为媒染剂,它能与结晶紫结合形成一种不溶于水的复合物,增强染料与细菌的结合力。

再进行脱色。这是革兰染色的关键步骤。用95%乙醇滴加在涂片上,轻轻晃动载玻片,直至流下的乙醇无紫色为止,一般时间为20 - 30秒,然后立即用细水流冲洗,甩干。革兰阳性菌由于细胞壁较厚、肽聚糖含量高,乙醇处理后,肽聚糖网孔因脱水而收缩,阻止结晶紫 - 碘复合物的溶出,故仍保留紫色;而革兰阴性菌细胞壁薄、外膜易被乙醇溶解,导致结晶紫 - 碘复合物被溶出,细菌脱色。

最后是复染。滴加稀释复红染液,染色30秒,用细水流冲洗,吸干水分。稀释复红可将脱色后的革兰阴性菌染成红色,而革兰阳性菌仍保留紫色。

通过以上步骤,在显微镜下观察,革兰阳性菌呈紫色,革兰阴性菌呈红色,从而完成细菌的革兰染色鉴别。

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