杂交瘤技术是一种制备单克隆抗体的重要技术,其原理要点主要包括以下几个方面。
首先是细胞融合的基础。该技术主要涉及两种细胞的融合,即免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞。免疫的B淋巴细胞是经过特定抗原免疫动物后获得的,它能够产生针对该抗原的特异性抗体,但这类细胞在体外不能无限增殖。而骨髓瘤细胞则具有在体外无限增殖的能力,然而它本身不能产生抗体。通过细胞融合技术,将这两种细胞的特性结合起来,形成既能产生特异性抗体又能在体外无限增殖的杂交瘤细胞。
其次是细胞融合的方法。常用的细胞融合剂是聚乙二醇(PEG),它可以改变细胞膜的流动性,促使两种细胞紧密接触并发生融合。在融合过程中,会形成多种细胞组合,如B淋巴细胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合以及B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合等。
然后是筛选过程。为了筛选出所需的杂交瘤细胞,通常采用HAT培养基。HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)。氨基蝶呤能阻断细胞内DNA合成的主要途径,而正常细胞可以通过补救途径利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成DNA。未融合的骨髓瘤细胞由于缺乏合成DNA补救途径的关键酶,在HAT培养基中会死亡;未融合的B淋巴细胞在体外不能长期存活也会逐渐死亡。只有杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力,又能利用B淋巴细胞的补救途径合成DNA,从而在HAT培养基中存活并生长。
最后是克隆化培养和抗体检测。筛选出的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养,以确保每个克隆都是由单个杂交瘤细胞增殖而来,从而保证所产生的抗体为单克隆抗体。同时,需要对克隆化培养的杂交瘤细胞所产生的抗体进行检测,筛选出能产生高亲和力、高特异性抗体的杂交瘤细胞株,用于大量制备单克隆抗体。
综上所述,杂交瘤技术通过细胞融合、筛选、克隆化培养等一系列步骤,成功实现了特异性单克隆抗体的制备,为免疫学研究和临床诊断治疗等领域提供了重要的工具。
首先是细胞融合的基础。该技术主要涉及两种细胞的融合,即免疫的B淋巴细胞和骨髓瘤细胞。免疫的B淋巴细胞是经过特定抗原免疫动物后获得的,它能够产生针对该抗原的特异性抗体,但这类细胞在体外不能无限增殖。而骨髓瘤细胞则具有在体外无限增殖的能力,然而它本身不能产生抗体。通过细胞融合技术,将这两种细胞的特性结合起来,形成既能产生特异性抗体又能在体外无限增殖的杂交瘤细胞。
其次是细胞融合的方法。常用的细胞融合剂是聚乙二醇(PEG),它可以改变细胞膜的流动性,促使两种细胞紧密接触并发生融合。在融合过程中,会形成多种细胞组合,如B淋巴细胞与B淋巴细胞融合、骨髓瘤细胞与骨髓瘤细胞融合以及B淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合等。
然后是筛选过程。为了筛选出所需的杂交瘤细胞,通常采用HAT培养基。HAT培养基中含有次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)和胸腺嘧啶核苷(T)。氨基蝶呤能阻断细胞内DNA合成的主要途径,而正常细胞可以通过补救途径利用次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷合成DNA。未融合的骨髓瘤细胞由于缺乏合成DNA补救途径的关键酶,在HAT培养基中会死亡;未融合的B淋巴细胞在体外不能长期存活也会逐渐死亡。只有杂交瘤细胞既具有骨髓瘤细胞无限增殖的能力,又能利用B淋巴细胞的补救途径合成DNA,从而在HAT培养基中存活并生长。
最后是克隆化培养和抗体检测。筛选出的杂交瘤细胞还需要进行克隆化培养,以确保每个克隆都是由单个杂交瘤细胞增殖而来,从而保证所产生的抗体为单克隆抗体。同时,需要对克隆化培养的杂交瘤细胞所产生的抗体进行检测,筛选出能产生高亲和力、高特异性抗体的杂交瘤细胞株,用于大量制备单克隆抗体。
综上所述,杂交瘤技术通过细胞融合、筛选、克隆化培养等一系列步骤,成功实现了特异性单克隆抗体的制备,为免疫学研究和临床诊断治疗等领域提供了重要的工具。

学员讨论(0)
相关资讯













扫一扫立即下载


