细胞介导淋巴细胞功能的测定方法主要分为体内试验和体外试验两大类,以下为您详细介绍:
体内试验主要是通过迟发型超敏反应来检测。该方法的原理是,当机体受到抗原刺激后,T淋巴细胞会被致敏,再次接触相同抗原时,会引发迟发型超敏反应,出现以单个核细胞浸润为主的炎症。常用的皮内试验是将一定量的抗原注入皮内,经过一定时间后观察局部反应。若注射部位出现红肿、硬结等现象,根据红肿、硬结的大小来判断反应强度,以此评估淋巴细胞的功能。这种方法简单易行,能反映机体整体的细胞免疫功能状态,但也存在个体差异大、影响因素多等缺点。
体外试验的方法较多。淋巴细胞增殖试验是常用的方法之一,其原理是淋巴细胞在受到有丝分裂原(如植物血凝素、刀豆蛋白A等)或特异性抗原刺激后,会发生增殖反应。可以通过放射性核素掺入法,如用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H - TdR)掺入正在增殖的淋巴细胞中,然后通过测定放射性强度来反映淋巴细胞的增殖程度;也可以采用MTT比色法,MTT可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成不溶性的蓝紫色结晶甲瓒,通过酶标仪测定吸光度值来判断细胞增殖情况。
细胞毒性试验也是重要的体外检测方法。主要用于检测效应细胞(如细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤细胞等)对靶细胞的杀伤活性。常用的方法有51Cr释放法,用放射性核素51Cr标记靶细胞,当效应细胞杀伤靶细胞后,51Cr会释放到培养液中,通过测定培养液中的放射性强度,计算出靶细胞的杀伤率,从而评估效应细胞的细胞毒活性。此外,还有乳酸脱氢酶释放法等非放射性标记方法,乳酸脱氢酶是活细胞胞质内的酶,当细胞受损时会释放到培养液中,通过测定培养液中乳酸脱氢酶的活性来反映细胞的损伤程度,进而评估细胞毒性。
细胞因子检测同样能反映淋巴细胞功能。淋巴细胞在活化后会分泌多种细胞因子,如白细胞介素、干扰素等。可以采用ELISA法,利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过酶催化底物显色来定量检测细胞因子的含量;也可以使用流式细胞术,能
体内试验主要是通过迟发型超敏反应来检测。该方法的原理是,当机体受到抗原刺激后,T淋巴细胞会被致敏,再次接触相同抗原时,会引发迟发型超敏反应,出现以单个核细胞浸润为主的炎症。常用的皮内试验是将一定量的抗原注入皮内,经过一定时间后观察局部反应。若注射部位出现红肿、硬结等现象,根据红肿、硬结的大小来判断反应强度,以此评估淋巴细胞的功能。这种方法简单易行,能反映机体整体的细胞免疫功能状态,但也存在个体差异大、影响因素多等缺点。
体外试验的方法较多。淋巴细胞增殖试验是常用的方法之一,其原理是淋巴细胞在受到有丝分裂原(如植物血凝素、刀豆蛋白A等)或特异性抗原刺激后,会发生增殖反应。可以通过放射性核素掺入法,如用氚标记的胸腺嘧啶核苷(3H - TdR)掺入正在增殖的淋巴细胞中,然后通过测定放射性强度来反映淋巴细胞的增殖程度;也可以采用MTT比色法,MTT可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成不溶性的蓝紫色结晶甲瓒,通过酶标仪测定吸光度值来判断细胞增殖情况。
细胞毒性试验也是重要的体外检测方法。主要用于检测效应细胞(如细胞毒性T淋巴细胞、自然杀伤细胞等)对靶细胞的杀伤活性。常用的方法有51Cr释放法,用放射性核素51Cr标记靶细胞,当效应细胞杀伤靶细胞后,51Cr会释放到培养液中,通过测定培养液中的放射性强度,计算出靶细胞的杀伤率,从而评估效应细胞的细胞毒活性。此外,还有乳酸脱氢酶释放法等非放射性标记方法,乳酸脱氢酶是活细胞胞质内的酶,当细胞受损时会释放到培养液中,通过测定培养液中乳酸脱氢酶的活性来反映细胞的损伤程度,进而评估细胞毒性。
细胞因子检测同样能反映淋巴细胞功能。淋巴细胞在活化后会分泌多种细胞因子,如白细胞介素、干扰素等。可以采用ELISA法,利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过酶催化底物显色来定量检测细胞因子的含量;也可以使用流式细胞术,能

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