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针对β-内酰胺酶的常见检测方法

2019-03-15 14:14 医学教育网
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医学教育网小编整理了针对β-内酰胺酶的常见检测方法如下,请各位考生仔细查看。

(一)微生物活性消失法

此法是以一株对青霉素高度敏感的枯草芽胞杆菌的指示菌,如待检菌株产生β内酰胺酶,破坏了青霉素,则在划线两边有枯草芽胞菌生长,否则指示菌仍呈很大抑菌环。

(二)淀粉-碘测定法

β内酰胺酶破坏β内酰胺环,碘与被打开β内酰胺环结合,使蓝色的淀粉-碘复合物转变成无色。

方法:用pH6.0磷酸缓冲液配制青霉素悬液6000μg/ml,取该液0.1ml置于微量稀释板凹孔中,挑选检测菌株数个菌落混悬于其中,摇动30min,静置室温中1h,加淀粉液2滴,再加碘液1滴,混合,立即观察颜色变化,阳性者当加入碘液后,首先立即出现蓝色、如在10min内消失蓝色,提示该菌产生β-内酰胺酶。

(三)酸测量法

青霉素被β-内酶胺酶水解后成青霉素酸,pH值下降6.8以下,用酚红指示剂,由红(紫)色(原液:枸橼酸缓冲液pH8.5)→黄色(pH6.8以下)。

(四)头孢硝基噻吩显色反应

头孢硝基噻吩(Nitrocefin)的β-内酰胺环被β-内酰胺酶打开,基质由黄色变成红色。

液体方法:10mg头孢硝基噻吩溶解于lml的二甲基亚砜中,然后用0.1mol/LPBS(pH7.0)再稀释1:20,最后浓度为500μg/m1,溶液呈黄或淡橙色,保存4~10℃,可用几个星期。取该溶液0.05ml置放于微量稀释板凹孔中或小试管中,挑取被试菌落,制成浓厚悬液,与凹孔中基质液混和,室温10~30min,头孢硝基噻吩由黄变成红色为阳性,若显色不明显,观察可延长6h.

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