对流免疫电泳原理:
原理
在一定条件下,胶体颗粒是带有电荷的,这些带电胶体颗粒在电的影响下发生移动。如胶体颗粒带负电,则移向阳极;反之,移向阴极。这种现象称为电泳。
对流免疫电泳是将病人血清(待检抗原)放在琼脂板阴极端孔内,已知抗血清(含有已知抗体)放于阳极端孔内,在碱性环境条件下同时进行电泳,抗原由阴极向阳极移动快,医|学教育网搜集整理而抗体系丙种球蛋白,等电点在pH6~7之间,故带负电荷少,移动速度慢,由于电渗作用结果向阴极倒退,于是抗原抗体在电场中相遇,当两者比例适当时,则特异性抗原抗体互相结合,便形成肉眼可见的白色沉淀线。
材料
1.1%,PH8.6,0.075M巴比妥缓冲液。
2.抗AFP血清,已知AFP阳性血清,待检病人血清。
3.玻片、吸管、打孔器、毛细滴管、电泳仪等。
方法
1.将用缓冲液配制好的1.2%琼脂隔水加热溶化,趁热吸取3.5ml加于玻片上,冷凝后打孔,孔直径3毫米,二孔间距离3毫米。
2.分别从上至下向左列1、3、5孔内加入抗AFP血清;向右列2孔内加待检病人血清,4孔内加已知AFP阳性血清作为阳性对照,6孔内加已知阴性对照血清。各孔加满为度,勿使外溢。
3.将琼脂板置于电泳槽内,抗原端入阴极侧,抗体放阳极侧,二端贴上浸透电泳缓冲液的4层纱布条。
4.通电,固定电压5-6伏/厘米长,通电45~60分钟左右。
结果观察电泳毕,关闭电源,取出琼脂板。在黑色背景上方,透过散射光线,首先观察3与4孔间(阳性对照组)、5与6孔间(阴性对照组)的白色沉淀线是否出现;再看试验孔,如孔间未出现这样的沉淀线,则该待检血清为AFP阴性血清。