由于细菌产生的酶系不同，因而对底物的分解能力不同，其代谢产物也不同。用生物化学方法测定这些代谢产物，可用来鉴定细菌，这种生化反应测定方法也称生化试验。

　　细菌的生化试验是将已分离纯化的待检细菌，接种到一系列含有特殊物质和指示剂的鉴别培养基中，观察该菌在这些培养基内的pH变化，或是否产生某种特殊的代谢产物，现代细菌学已普遍采用微量、快速、自动化等鉴定系统，已有很多相应的配套试剂供种属鉴定使用，常见的生化试验有：

　　1.糖（醇、苷）类发酵试验：各种细菌分解糖（醇、苷）的能力不同，分解后代谢产物不同，可根据其分解产物鉴别细菌。实际应用中，可选择合适的含有单糖、双糖、三糖或多糖的培养基医学|教育网搜集整理，接种待检菌，经培养后观察结果。若能分解糖类产酸，培养基中的指示剂呈酸性反应；产气的细菌则出现气泡或裂隙。如大肠杆菌能分解乳糖，伤寒杆菌与痢疾杆菌则不能，用此可加以区别。糖发酵试验是鉴定细菌最常用的生化反应，特别用于肠杆菌科细菌的鉴定。

　　2.甲基红试验：细菌分解葡萄糖形成丙酮酸，丙酮酸进一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等混合酸，使培养基pH下降至4.4以下，加入甲基红指示剂变为红色。若产酸量少或将酸进一步分解为醇、酮、醛等，使培养基pH在5.4以上，甲基红试验则呈橘黄色。该试验简称为MR试验。将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基内，培养后滴加甲基红试剂，呈红色为MR试验阳性，橘红色为弱阳性，橘黄色为阴性。该试验主要用于大肠埃希菌和产气肠杆菌的鉴别，前者阳性，后者阴性。

　　3.VP试验：有些细菌能使丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，进而在碱性溶液中被空气中的氧氧化成双乙酰，双乙酰在α-萘酚和肌酸的催化下，生成红色化合物，为VP试验阳性。将待检菌接种于葡萄糖蛋白胨水培养基，培养后按每毫升培养基加入含0.3%肌酸或肌酐的0.1ml40%KOH溶液，48～50℃水浴2h或37℃4h，充分摇动后观察结果，红色为VP试验阳性。

　　4.吲哚试验：有些细菌含有色氨酸酶，分解培养基中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对二甲基氨基苯甲醛作用，形成玫瑰吲哚而呈红色。该试验也称靛基质试验。将待检菌接种于蛋白胨水培养基中，培养后沿管壁加入对二甲基氨基苯甲醛试剂0.5ml，使其形成两层液面，两液面接触处呈红色为阳性，无色为阴性医学|教育网搜集整理。该试验主要用于肠道杆菌的鉴定。

　　5.硫化氢试验：有些细菌分解含硫氨基酸生成硫化氢，遇培养基中的醋酸铅或硫酸亚铁可形成黑色的硫化铅或硫化亚铁沉淀。将待检菌接种于醋酸铅培养基中培养，有黑色沉淀者为阳性，无变化者为阴性。H2S试验常用于肠杆菌科菌属间的鉴定。