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微生物培养基的成分|制法|用途

2017-02-07 15:43 医学教育网
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微生物培养基的成分|制法|用途不仅仅是医学检验士要考的内容,也是我们工作中需要用到的知识,想知道微生物培养基的成分|制法|用途请阅读一下内容,要系统了解知识点就请报名参加我们的课程吧。

一、营养琼脂(普通琼脂)

成份:牛肉浸液(或其它浸液,消化液或肉膏汤)100毫升

琼脂(视天气,琼脂质量而定)

制法:将上物加热溶解,补足水,调ph至7.6,过滤分装121℃,高压灭菌15分钟。

用途:作普通琼脂平皿。

二、血琼脂平板(BA)

制法:取营养琼脂(PH7.6),加热使其溶解待冷至45-50℃,以灭菌操作于每100毫升营养琼脂加灭菌脱纤维羊血或兔血5-10毫升,轻轻摇匀,立即倾注于平板或分装试管,制成斜面备用。

用途:

1.一般棉拭子均接种此培养基。

2.尿液,脓液

3.分离细菌标本用。

三、基础培养基(肉膏汤BB)

成份:蛋白胨10克牛肉膏5克

氯化钠5克水1000毫升

制法:将以上各物称好,加水煮沸溶解,用1NNOH校正PH至7.6,过滤分瓶,121℃高压灭菌,20分钟备用。

用途:

1作耐药试验,增菌用分装小管。

2作普通琼脂斜面。

四、血液培养基(大管肉汤培养基)

成份:

1新鲜牛肉浸液1000毫升

2PABA(对氨基苯甲酸〔相当于10mg/毫升〕)1g%1毫升

3MgSO4[相当于0.493/100毫升]49.3%1毫升

4枸椽酸钠0.3g

制法:

1将1号,4号混合液,2号,3号液分装高压灭菌。

2取灭菌1,4号混合液用无菌法加入PABA,MgSO4,再分管,行无菌试验三天方可使用。

用途:作血,骨髓培养用。

五、肠道杆菌培养基(伊红美兰琼脂)

成份:蛋白胨10克乳糖10克

氯化钠5克琼脂25(22)克

水1000毫升2%伊红溶液20毫升

0.5%美兰溶液20毫升

制法:将蛋白胨,氯化钠琼脂称好,加水1000毫升使溶解,校正PH7.4过滤,补足失水,加入2%伊红溶液20毫升,0.5%美兰溶液20毫升,(115℃高压20分钟),冷却至50℃左右倾注平板,凝固后存冰箱备用。(高压以后方可再加乳糖)

用途:用作分离沙门氏,志贺氏菌属,也作菌群调查。

六、罗文斯坦培养基

成份:磷酸二氢钾2.4克硫酸镁0.24克

枸椽酸钠0.6克天门冬素3.6克

纯甘油(丙三醇)12毫升水600毫升

马铃薯粉30克鸡蛋1000毫升(约3公斤)

2%孔雀绿水溶液20毫升

制法:

1除鸡蛋外(还有孔雀绿)。可将其它物品称好,放入大三角瓶包扎好,高压灭菌。

2鸡蛋用75%酒精泡30分钟,灭菌法打蛋,倒入盛有玻璃珠的灭菌三角烧瓶内充分将鸡蛋摇散。

3将各成份按比例配好,分装每管约5毫升。

4间歇灭菌第一次90℃1小时,第二次80℃半小时,第三次80℃半小时(或放85℃烤箱内连续二次)。

质控标准:

1灭菌试验合格。

2接种结核杆菌要求两星期生长良好。

用途:作结核分枝杆菌培养用。

七、结核半固体培养基

成份:磷酸氢二钠19克硫酸镁0.6克

磷酸二氢钾2.5克天门冬素5克

1%孔雀绿1.5克甘油20毫升

吐温80(10%)5毫升水1000毫升

枸椽酸钠2.5克动物血清100毫升

琼脂1.5克(80小时用甲醇去脂)

1%孔雀绿0.78毫升吐温80(10%)5毫升

加动物血清100毫升

制法:

1除血清外将上述药品均称好,放入煮沸溶解,调PH7。2

2分管(每管约10毫升)包扎好,高压,121℃半小时灭菌。

3待冷后无菌法加无菌血清(绵羊血或兔血)每管约1毫升备用。

4去除琼脂方法:医'学教育网搜集整理取琼脂若干或于三角烧瓶中加甲醇于琼脂1毫升用塞密封,放37℃温浴80小时,每天摇动一次,冷却后到时取出用滤纸过滤,待琼脂自然冷却后备用。

质控标准:

1无菌实验合格。

2琼脂硬度合适而清亮。

3接种标准结核杆菌用,强度合适即可用。

用途:培养结核杆菌用。

八、亚碲酸钾血琼脂平板

成份:琼脂基础100毫升10%葡萄糖2毫升

1%亚碲酸钾4.5毫升绵羊血10毫升

制法:

1将琼脂基础溶解好,加入羊血。

2马上加热使成咖啡色后,稍冷再加入10%葡萄糖2毫升与1%亚碲酸4.5毫升混合后倒入无菌平板,凝固后存冰箱备用。

质控标准:接种白喉杆菌生长良好,其它革兰氏阴性菌均抑制生长。

用途:供培养及鉴别白喉杆菌用。

九、米培养基

成份:白米20克水1000毫升

琼脂20克吐温8010毫升

制法:

1将20克米加水200毫升煮沸45分钟,煮时将容器盖好。

2用纱布过滤,只要米汤,不要饭,加水至1000毫升。

3加琼脂20克,吐温-8010毫升煮溶,分装中型管(每管约3毫升),包扎好,高压,121℃半小时,消毒备用。

质控标准:1灭菌。

2要求清亮。

3接种白色念珠菌17-24小时生长良好,并产生厚膜孢子。

用途:培养白色念珠菌用。

十、蛋白胨水培养基

成份:蛋白胨1克氯化钠0.5克

水加至100毫升PH调至7.8

制法:把以上各物称好溶于水,调节PH7.6分装消毒备用。

质控标准:1放置37℃无菌生长。

2接种大肠杆菌24小时生长良好。

3可作中国兰平板基础液。

可作靛基质基础液(作此试验需要色氨酸蛋白胨)。

十一、血培养基

成份:蛋白胨10克牛肉膏5克

氯化钠5克葡萄糖3克

枸椽酸钠3克MgSO4.7H2O25.0毫升

0.5%PABA10毫升酵母浸液10毫升0.2克(2%过滤)

酚红0.4%6毫升水1000毫升

琼脂0.5克 作大BB,小BB时,不要加酚红和琼脂。

制法:

1、除PABA、硫酸镁、酚红外均称好煮化调PH7.4

2、调好PH后再加酚红。

3、硫酸镁、PABA另外无菌再加入(亚细,小BB)

十二、沙氏培养基

成份:蛋白胨1克水100毫升

琼脂1.5克(琼脂粉1克%)葡萄糖或麦芽糖4克

制法:

1将上述物质称好,放入水中煮沸溶解(不必调PH即有5左右)分中号试管(约4毫升)包扎,高压115℃20分钟。

2趁热斜好,凝固备用。

质控标准:

1无菌试验合格。

2接种霉菌比在其它培养基上生长良好,其它菌生长不好。

用途:作分离培养霉菌用。

注意:

1接种临床新鲜标本可先加1-2滴70%酒精让干后再接种于含12.5%氯霉素沙氏斜面培养基上。

2也可用蜂蜜8克代替葡萄糖或麦芽糖。

十三、肉渣培养基

成份:牛肉渣牛肉浸液(牛肉膏)

制法:将做牛肉浸液的牛肉渣,装入试管,高约3毫米,加入牛肉浸液或牛肉膏汤(PH7.6)约5毫升,比肉渣高一倍,液面上加入已溶解的凡士林,高约0.5厘米(不加也可),121℃高压灭菌20-30分钟后保存于冰箱内备用。

用途:用于厌氧菌培养。

注意:如无肉渣也可用牛、羊血等代替,将血块先放入水内煮沸,取出成小块,血块在加热后摇匀成碎颗粒状。

十四、单糖发酵管培养基(半固体)

成份:PH7.6-7.8蛋白胨水1000毫升(0.3克/100毫升)

1.2%酚红液0.4毫升

琼脂0.4-0.5克

10%糖或醇10毫升

制备:把蛋白胨水,琼脂加热溶解,然后加1.2%酚红液0.4毫升,10%糖10毫升,混匀,分装试管,每管约2-3毫升,经115℃高压灭菌20分钟后,分置于试管架上,贴上各类糖或醇类标签备用。

质控标准:细菌发酵糖类或醇而产生酸,能使培养基PH改变,指示剂由红变黄色,如因发酵产生气体则半固体内产生气泡,如有动力则半固体由清亮变混浊。

十五、明胶培养基

成份:肉浸液1000毫升(牛肉浸膏5克)

明胶12克

制法:

100毫升肉浸液中,加入明胶12克,隔水加热煮化,校正PH7.2,分装小号试管,用阿诺氏间歇灭菌80℃30分钟,连续3日,或者108℃高压20分钟,冷却,贮存备用。

15-1、碱性蛋白胨水

成份:

蛋白胨20克氯化钠5克

硝酸钾0.1克结晶碳酸钠(NaclCO3.12H2O)0.2克

水1000毫升

制法:将蛋白胨,Nacl,硝酸钾,结晶碳酸钠称好,溶于1000DW中,校正PH8.4分装试管,121℃高压灭菌15分钟后备用。

用途:用于霍乱弧菌培养。

十六、葡萄糖蛋白胨水(M。V用)

成份:蛋白胨5克葡萄糖5克

K2HPO45克水1000毫升

制法:将上述称好溶解分装试管,调PH7.4高压灭菌115℃灭菌20分钟,或者葡萄糖加热煮沸后再倒试管

标准:灭菌试验合格。接种大肠杆菌VP阴性,M阳性;接种产气杆菌VP阳性,M阴性。

用途:作鉴别肠道杆菌用。

十七、枸椽酸盐培养基

成份:磷酸二氢铵0.1克硫酸镁0.02克

磷酸氢二钾0.1克枸椽酸钠0.23--0.5克(0.36)

氯化钠0.5克琼脂1.5克

0.5%溴麝香草酚兰2毫升(调PH6.8再加)

制法:将上述称好,放入水中煮沸溶解,调PH6.8,然后分装中号试管,高压灭菌,趁热倒呈斜面,凝固

后备用。

标准:

1、灭菌试验合格,培养基呈果绿色适宜。

2、接种大肠杆菌,培养基上不生长,也不变色。

3、接种产气杆菌,培养基呈深兰色。

用途:作鉴别大肠杆菌用。

十八、双糖铁培养基

成份:

下层:蛋白胨1克氯化钠0.5克

葡萄糖0.2克琼脂0.3-0.5克

水100毫升

将上述物质混匀调PH7.6后加1.2%酚红0.4毫升

上层:蛋白胨1克氯化钠0.5克

乳糖1克硫代硫酸钠0.03克

硫酸亚铁0.02克琼脂1克

水100毫升

制法:1将下层配好,分装中号试管(1毫升),塞好包扎,15磅高压灭菌半小时,使凝固后备用。

2制上层时,先将蛋白胨水制好,加入硫酸亚铁,硫代硫酸钠,加热溶解PH8.1,再加入酚红分瓶,(每瓶300毫升,称取琼脂包扎灭菌,趁热加入乳糖隔水煮沸30分钟或112℃消毒15分钟)。

3取已制的下层管,每管用无菌法倒入上层液约1。5毫升,边斜放置使成斜面,凝固后备用。

标准:无菌试验合格,接种大肠杆菌下层产酸产气,上层产酸。

十九、尿素培养基

成份:蛋白胨0.1克氯化钠0.5克

磷酸二氢钾0.2克尿素0.2克(或10%2毫升)

葡萄糖0.01克(或10%葡萄糖0.1毫升)

H2O100毫升酚红(0.2%)0.4毫升

制法:1除葡萄糖,尿素外把其它药品称好放入水中煮沸,使溶解,调PH7.2过滤,15磅高压灭菌15分钟.

2配制尿素(灭菌)液:每100毫升基液内加2毫升.

3配制10%葡萄糖(灭菌)每100毫升加0.1毫升.

4分装小试管待用.

标准:

1灭菌试验合格.

2接种变形杆菌24小时呈红色.

用途:鉴定变形杆菌用.

二十、胆盐中性红琼脂

成份:蛋白胨琼脂PH7.2-7.45000毫升

胆盐2.5克

乳糖5.0克

对氨基苯甲酸25毫克

1%中性红溶液25毫升

制法:

将胆盐,对氨基苯甲酸,乳糖趁热加入已灭菌之蛋白胨琼脂中,待冷至50-60℃时,加入1%中性红液2.5毫升,混合后即倾注平皿,凝固待用.

1%中性红:1克中性红加酒精60毫升,加水40毫升

二十一、丙二酸盐培养基(缩苹果酸钠)

成份:丙二酸钠0.3克酵母浸膏0.1克

Nacl0.2克硫酸铵0.2克

K2HPO40.06克KH2PO40.04克

水100毫升

PH6.8,高压灭菌备用.

0.2%溴麝香酚兰乙醇1.25毫升

制法:与枸椽酸盐利用试验相类似,是测定细菌能否利用丙二酸盐与碳源.无机铵盐为氨源而生长,生长者使培养基变成碱呈兰色.

鉴定:克氏杆菌(+)赫夫尼亚(+)

沙门氏菌(—)痢疾杆菌(—)

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