生物素-亲和素系统在ELISA（酶联免疫吸附测定）中的应用可以显著提高检测的灵敏度。这是因为生物素与亲和素之间的结合具有极高的特异性和亲合力，比抗原抗体间的相互作用强得多。具体来说，在ELISA中使用该系统时，可以通过以下方式来提升灵敏度：
1. 放大信号：在传统的直接或间接ELISA方法基础上引入生物素-亲和素系统后，可以实现对目标分子的多级放大效应。例如，在捕捉抗体被固定于固相载体上之后，先加入生物素化的检测抗体与待测抗原结合形成复合物；随后再添加链霉亲和素标记的酶（如辣根过氧化物酶），由于每个链霉亲和素分子可以同时结合多个生物素化分子，因此能够显著增加标记酶的数量，从而放大最终底物显色反应产生的信号。
2. 减少非特异性结合：利用高亲合力的生物素-亲和素相互作用，可以在洗涤步骤中更有效地去除未结合或弱结合的试剂，减少背景干扰，提高信噪比。这有助于检测低浓度的目标抗原或抗体，使得ELISA具有更高的灵敏度。
3. 增强稳定性：由于链霉亲和素与生物素之间的结合非常稳定，在实验操作过程中不易受到温度、pH值变化等因素的影响，保证了整个系统的可靠性和重复性。
综上所述，通过引入生物素-亲和素系统，ELISA技术不仅提高了检测灵敏度，还增强了结果的准确性和稳定性。
1. 放大信号：在传统的直接或间接ELISA方法基础上引入生物素-亲和素系统后，可以实现对目标分子的多级放大效应。例如，在捕捉抗体被固定于固相载体上之后，先加入生物素化的检测抗体与待测抗原结合形成复合物；随后再添加链霉亲和素标记的酶（如辣根过氧化物酶），由于每个链霉亲和素分子可以同时结合多个生物素化分子，因此能够显著增加标记酶的数量，从而放大最终底物显色反应产生的信号。
2. 减少非特异性结合：利用高亲合力的生物素-亲和素相互作用，可以在洗涤步骤中更有效地去除未结合或弱结合的试剂，减少背景干扰，提高信噪比。这有助于检测低浓度的目标抗原或抗体，使得ELISA具有更高的灵敏度。
3. 增强稳定性：由于链霉亲和素与生物素之间的结合非常稳定，在实验操作过程中不易受到温度、pH值变化等因素的影响，保证了整个系统的可靠性和重复性。
综上所述，通过引入生物素-亲和素系统，ELISA技术不仅提高了检测灵敏度，还增强了结果的准确性和稳定性。
学员讨论（0）
相关资讯
扫一扫立即下载
