在实验室中分离和培养嗜血杆菌，需要遵循一系列的标准程序以确保结果的准确性。嗜血杆菌是一类需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性短小杆菌，它们通常需要特定的生长条件。下面是分离培养嗜血杆菌的基本步骤：
1. 采集样本：首先从疑似感染部位正确采集临床样本，如鼻咽拭子、血液、脑脊液等。
2. 初步处理：将收集到的标本尽快送往实验室，并根据不同的来源进行适当的预处理。例如，对于呼吸道分泌物可以先用生理盐水稀释后接种；而血培养则直接加入专用的增菌液中。
3. 选择合适的培养基：嗜血杆菌对营养要求较高，一般使用巧克力琼脂（因为经过加热处理后的血液能够释放出X因子和V因子）或者改良的Thayer-Martin培养基。这些特殊成分有助于促进细菌生长并抑制其他微生物的发展。
4. 接种与孵育：用无菌技术将处理好的样本均匀涂抹于上述培养基表面，然后置于35-37℃、含有5%二氧化碳的环境中培养24至48小时。
5. 观察结果：在适宜条件下生长良好的嗜血杆菌会形成圆形、光滑、湿润且略带透明或灰色的小菌落。通过显微镜检查和生化测试（如β-内酰胺酶试验）可以进一步确认分离物是否为嗜血杆菌属的成员。
6. 保存与纯化：如果需要长期保存，可将阳性培养物转移至斜面或冷冻保护剂中，并在4℃冰箱或者液氮罐内冷藏。同时为了保证菌种的纯净度，在每次使用前都应进行一次平板划线操作以获得单个菌落。

以上步骤是实验室常规分离和培养嗜血杆菌的方法，但具体操作时还需结合实际情况调整，并严格遵守生物安全规范。