酶联免疫吸附试验（ELISA）是一种基于抗原抗体特异性结合反应的检测技术，主要用于测定样本中的特定蛋白质、病毒、激素等物质。其基本原理包括以下几个步骤：
1. 包被：首先将已知的抗原或抗体固定在固相载体上，如微孔板，这一步称为包被。
2. 封闭：为了减少非特异性结合，通常需要加入一种封闭液（例如含有BSA或脱脂奶粉的缓冲溶液），以覆盖未与抗原/抗体结合的位点。
3. 加样：将待测样本加到已经包被并封闭好的微孔板中。如果样本中含有目标物质，则会与固定在固相载体上的捕获抗体发生特异性结合；若无目标物存在，则不会形成复合体。
4. 洗涤：通过洗涤步骤去除未结合的成分，保留下来的只有那些与固相表面抗原或抗体发生了特异性结合的部分。
5. 加入酶标二抗：加入能够识别一抗并带有标记酶（如辣根过氧化物酶HRP）的第二抗体。这种酶标二抗会与样本中的一抗相结合形成“抗原-抗体-酶标二抗”复合体。
6. 洗涤：再次洗涤以除去未结合的酶标二抗。
7. 显色反应：加入底物溶液，酶标记的二抗会导致底物发生化学变化产生颜色。根据显色的程度可以判断样品中目标物质的浓度。
8. 终止与读数：使用终止液停止显色过程，并通过分光光度计测量吸光值来定量分析待测物含量。
ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于临床诊断和科学研究领域。
1. 包被：首先将已知的抗原或抗体固定在固相载体上，如微孔板，这一步称为包被。
2. 封闭：为了减少非特异性结合，通常需要加入一种封闭液（例如含有BSA或脱脂奶粉的缓冲溶液），以覆盖未与抗原/抗体结合的位点。
3. 加样：将待测样本加到已经包被并封闭好的微孔板中。如果样本中含有目标物质，则会与固定在固相载体上的捕获抗体发生特异性结合；若无目标物存在，则不会形成复合体。
4. 洗涤：通过洗涤步骤去除未结合的成分，保留下来的只有那些与固相表面抗原或抗体发生了特异性结合的部分。
5. 加入酶标二抗：加入能够识别一抗并带有标记酶（如辣根过氧化物酶HRP）的第二抗体。这种酶标二抗会与样本中的一抗相结合形成“抗原-抗体-酶标二抗”复合体。
6. 洗涤：再次洗涤以除去未结合的酶标二抗。
7. 显色反应：加入底物溶液，酶标记的二抗会导致底物发生化学变化产生颜色。根据显色的程度可以判断样品中目标物质的浓度。
8. 终止与读数：使用终止液停止显色过程，并通过分光光度计测量吸光值来定量分析待测物含量。
ELISA具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，广泛应用于临床诊断和科学研究领域。
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