酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）是一种基于抗原抗体特异性结合的生物化学技术。其基本原理是利用酶标记的抗体或抗原来检测特定的蛋白质或其他分子。具体来说，ELISA包括以下几个主要步骤：
1. 包被：首先将待测抗原（直接法）或者已知抗原（间接法/夹心法）固定在固相载体上，如微孔板中。这一步称为包被。
2. 封闭：为了减少非特异性结合，通常会在包被后使用一种蛋白溶液（比如牛血清白蛋白或脱脂奶粉等）覆盖所有未被抗原占据的位点，这个过程叫做封闭。
3. 加样：向微孔板中加入待测样本。如果样本中含有目标抗体，则这些抗体会与固定在载体上的抗原结合；反之亦然。
4. 洗涤：通过洗涤去除没有特异性结合到固相表面的物质，以减少背景干扰。
5. 酶标二抗孵育：对于间接法和夹心法ELISA，在这一步加入酶标记的第二抗体。这种抗体能够识别并结合之前步骤中形成的复合物。
6. 洗涤：再次洗涤去除未结合的酶标二抗。
7. 底物反应：向微孔板内加入特定底物，经过一段时间后，如果存在目标物质，则酶会催化底物发生颜色变化。根据颜色深浅可判断样品中目标分子的浓度高低。
8. 测定吸光度：使用分光光度计测量各孔在特定波长下的吸光值，从而定量分析样本中的目标分子含量。

总之，ELISA技术通过酶标记抗体或抗原与待测物之间的特异性结合，并借助底物显色来实现对目标物质的检测和定量。