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平板划线法分离纯化细菌的具体步骤是什么?

2026-01-12 16:24 来源:正保医学教育网
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平板划线法是一种常用的微生物学技术,用于从混合菌群中分离出单一菌种。具体操作步骤如下:
1. 准备工作:首先确保所有使用的器材如接种环、培养皿等已经过灭菌处理;同时准备好固体培养基(如营养琼脂)的平板。
2. 取样:使用无菌技术从待分离的样本中取出少量细菌,可以是液体或固体样本。通常用接种环轻轻刮取表面或者挑取一小块组织。
3. 灼烧灭菌:将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红热状态以彻底杀死上面可能存在的其他微生物,然后让其自然冷却几秒钟以便于操作。
4. 划线:打开培养皿盖子的一侧,在平板的一个角落轻轻接触样本并沿着直线方向划出3-5条平行的细线。完成后立即关闭皿盖避免污染。
5. 灼烧灭菌再次:将接种环重新灼烧消毒,待冷却后准备下一步操作。
6. 分区划线:选择首次划线区域旁边的位置,以相同的方式进行第二次划线,但这次要与第一次的线条交叉形成网格状。每完成一个区域的操作都要重复第5步对工具进行灭菌处理。
7. 重复步骤:根据需要可以继续在平板其他未使用的部分进行更多次的分区划线,每次操作前后都需要灼烧接种环以保持无菌状态。
8. 培养:将平板倒置放入37℃恒温培养箱中过夜或按照特定细菌生长条件设定温度和时间。经过一定时间后,可以在平板上观察到单个菌落的形成,这些就是从原始样本中分离出来的纯种细菌。
9. 挑取菌落:当看到明显的独立菌落后,可以使用无菌接种环轻轻挑取其中一个或几个进行下一步研究或者保存。

通过上述步骤,就可以实现从复杂环境样品中获得纯净单一菌株的目的。

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