抗体依赖的细胞介导的细胞毒性(Antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)是一种重要的免疫反应机制,其中靶细胞被特异性抗体标记后,通过自然杀伤细胞(NK cells)、巨噬细胞或中性粒细胞等效应细胞表面的Fc受体识别并杀死。ADCC在抗肿瘤和抗病毒免疫中起着关键作用。
检测ADCC的方法有多种,常见的方法包括:
1. 放射性核素释放法:这是最经典的ADCC活性测定方法之一。通常使用放射性标记(如51Cr)的靶细胞与效应细胞以及特定抗体共孵育。如果发生ADCC反应,靶细胞会被破坏,导致放射性物质被释放到培养基中。通过测量上清液中的放射性计数来评估ADCC活性。
2. 荧光素酶报告基因法:此方法利用荧光素酶作为报告分子来监测细胞的生存状态或死亡情况。将含有荧光素酶表达载体的靶细胞与效应细胞及抗体共孵育后,检测荧光强度变化,从而反映ADCC的效果。
3. 流式细胞术分析:通过流式细胞仪可以快速准确地测定细胞表面标志物的变化或者细胞内特定分子水平的变化。例如,使用Annexin V-FITC/PI双染色法来评估细胞凋亡和坏死情况;也可以利用特异性抗体标记效应细胞和靶细胞,观察两者之间的相互作用。
4. MTT或CCK-8等细胞活力检测方法:这些基于颜色变化的生化测定可用于评价靶细胞存活率。当ADCC发生时,靶细胞减少,导致MTT或CCK-8转化能力下降,通过比色法测量吸光度值的变化来判断ADCC效应。
5. 酶联免疫吸附试验(ELISA):可以用来检测由ADCC反应产生的特定产物,如乳酸脱氢酶(LDH),其释放量与细胞损伤程度成正相关。此外,也可以通过ELISPOT技术测定效应细胞分泌的细胞因子水平来间接反映ADCC活性。
以上就是几种常用的ADCC检测方法,实际操作中可根据实验条件和目的选择合适的方法进行研究。
检测ADCC的方法有多种,常见的方法包括:
1. 放射性核素释放法:这是最经典的ADCC活性测定方法之一。通常使用放射性标记(如51Cr)的靶细胞与效应细胞以及特定抗体共孵育。如果发生ADCC反应,靶细胞会被破坏,导致放射性物质被释放到培养基中。通过测量上清液中的放射性计数来评估ADCC活性。
2. 荧光素酶报告基因法:此方法利用荧光素酶作为报告分子来监测细胞的生存状态或死亡情况。将含有荧光素酶表达载体的靶细胞与效应细胞及抗体共孵育后,检测荧光强度变化,从而反映ADCC的效果。
3. 流式细胞术分析:通过流式细胞仪可以快速准确地测定细胞表面标志物的变化或者细胞内特定分子水平的变化。例如,使用Annexin V-FITC/PI双染色法来评估细胞凋亡和坏死情况;也可以利用特异性抗体标记效应细胞和靶细胞,观察两者之间的相互作用。
4. MTT或CCK-8等细胞活力检测方法:这些基于颜色变化的生化测定可用于评价靶细胞存活率。当ADCC发生时,靶细胞减少,导致MTT或CCK-8转化能力下降,通过比色法测量吸光度值的变化来判断ADCC效应。
5. 酶联免疫吸附试验(ELISA):可以用来检测由ADCC反应产生的特定产物,如乳酸脱氢酶(LDH),其释放量与细胞损伤程度成正相关。此外,也可以通过ELISPOT技术测定效应细胞分泌的细胞因子水平来间接反映ADCC活性。
以上就是几种常用的ADCC检测方法,实际操作中可根据实验条件和目的选择合适的方法进行研究。

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