免疫细胞分离是免疫学研究和临床应用中的重要技术,常用方法有以下几种。
密度梯度离心法是一种常用的方法。它基于不同细胞的密度差异进行分离。常用的介质有Ficoll和Percoll等。以Ficoll - Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞为例,将抗凝血叠加于Ficoll分离液上,通过离心,由于各种血细胞的密度不同,会在分离液中形成不同的层次。红细胞和粒细胞因密度较大,沉于管底;血小板则因密度小,悬浮于血浆中;而单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度介于血浆和分离液之间,会聚集在血浆和分离液的界面处,从而实现单个核细胞的分离。这种方法操作相对简单,能获得一定纯度的单个核细胞,广泛应用于基础研究和临床检验。
免疫磁珠分离法是利用免疫磁珠与特定细胞表面抗原结合,在外加磁场的作用下,使结合磁珠的细胞与其他细胞分离。根据磁珠结合细胞的方式,可分为阳性分选和阴性分选。阳性分选是将磁珠标记的目标细胞从混合细胞中分离出来;阴性分选则是去除不需要的细胞,留下目标细胞。该方法具有特异性强、分离效率高的优点,能快速、准确地分离出特定的免疫细胞,在细胞治疗、肿瘤免疫研究等领域有重要应用。
流式细胞术也是一种先进的细胞分离技术。它利用流式细胞仪,根据细胞的大小、内部结构、表面抗原等特性,对细胞进行多参数分析和分选。细胞被荧光标记的抗体染色后,在流式细胞仪中逐个通过检测区,仪器根据细胞的荧光信号和散射光信号对细胞进行识别和分类,并通过静电偏转等方式将目标细胞分选出来。流式细胞术可以同时对多个参数进行分析和分选,分选纯度高,能实现对稀有细胞的分离,但设备昂贵,操作技术要求较高。
此外,还有贴壁分离法,它是利用单核细胞等具有贴壁生长的特性,将混合细胞悬液接种于培养瓶中,经过一定时间培养后,单核细胞会贴附在瓶壁上,而其他细胞则悬浮于培养液中,通过轻轻吹打或更换培养液等方法,可将贴壁的单核细胞与其他细胞分离。这种方法简单易行
密度梯度离心法是一种常用的方法。它基于不同细胞的密度差异进行分离。常用的介质有Ficoll和Percoll等。以Ficoll - Hypaque密度梯度离心法分离外周血单个核细胞为例,将抗凝血叠加于Ficoll分离液上,通过离心,由于各种血细胞的密度不同,会在分离液中形成不同的层次。红细胞和粒细胞因密度较大,沉于管底;血小板则因密度小,悬浮于血浆中;而单个核细胞(淋巴细胞和单核细胞)的密度介于血浆和分离液之间,会聚集在血浆和分离液的界面处,从而实现单个核细胞的分离。这种方法操作相对简单,能获得一定纯度的单个核细胞,广泛应用于基础研究和临床检验。
免疫磁珠分离法是利用免疫磁珠与特定细胞表面抗原结合,在外加磁场的作用下,使结合磁珠的细胞与其他细胞分离。根据磁珠结合细胞的方式,可分为阳性分选和阴性分选。阳性分选是将磁珠标记的目标细胞从混合细胞中分离出来;阴性分选则是去除不需要的细胞,留下目标细胞。该方法具有特异性强、分离效率高的优点,能快速、准确地分离出特定的免疫细胞,在细胞治疗、肿瘤免疫研究等领域有重要应用。
流式细胞术也是一种先进的细胞分离技术。它利用流式细胞仪,根据细胞的大小、内部结构、表面抗原等特性,对细胞进行多参数分析和分选。细胞被荧光标记的抗体染色后,在流式细胞仪中逐个通过检测区,仪器根据细胞的荧光信号和散射光信号对细胞进行识别和分类,并通过静电偏转等方式将目标细胞分选出来。流式细胞术可以同时对多个参数进行分析和分选,分选纯度高,能实现对稀有细胞的分离,但设备昂贵,操作技术要求较高。
此外,还有贴壁分离法,它是利用单核细胞等具有贴壁生长的特性,将混合细胞悬液接种于培养瓶中,经过一定时间培养后,单核细胞会贴附在瓶壁上,而其他细胞则悬浮于培养液中,通过轻轻吹打或更换培养液等方法,可将贴壁的单核细胞与其他细胞分离。这种方法简单易行

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