葡萄球菌分离可选用多种培养基，不同的培养基有其各自的特点和用途。

血琼脂平板是常用的培养基之一。葡萄球菌在血琼脂平板上能较好地生长，并且可以观察到其溶血现象。葡萄球菌可产生多种溶血素，在血琼脂平板上培养后，根据菌落周围溶血环的情况，有助于对葡萄球菌进行初步的鉴别。比如金黄色葡萄球菌可产生β - 溶血素，在血琼脂平板上会形成明显的透明溶血环，这对于判断是否为致病性葡萄球菌有重要的参考价值。

甘露醇高盐琼脂培养基也是分离葡萄球菌的重要选择。该培养基具有选择性，因为其含有较高浓度的氯化钠（通常为7.5% - 10%），大多数细菌在此高盐环境中生长受到抑制，而葡萄球菌具有耐盐性，能够在甘露醇高盐琼脂培养基上生长。同时，培养基中含有甘露醇和酸碱指示剂。致病性葡萄球菌如金黄色葡萄球菌能发酵甘露醇产酸，使培养基的pH值降低，导致酸碱指示剂变色，菌落周围培养基由紫色变为黄色，而非致病性葡萄球菌一般不发酵甘露醇，菌落周围培养基颜色不变，这样就可以将致病性和非致病性葡萄球菌区分开来。

哥伦比亚血琼脂培养基同样适用于葡萄球菌的分离。它营养丰富，能支持多种细菌的生长，葡萄球菌在该培养基上生长良好，形成典型的菌落形态，便于观察和进一步的鉴定操作。通过在不同培养基上培养葡萄球菌，结合其生长特征、生化反应等，可以更准确地对葡萄球菌进行分离和鉴定，为临床诊断和治疗提供重要依据。