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荧光抗体的制备有哪些要求呢

2020-03-02 22:15 医学教育网
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荧光抗体的制备有哪些要求呢?快来跟着小编了解一下吧!

(一)抗体要求

将荧光素与特异性抗体以化学共价键的方式结合而成。一般需经纯化提取IgG后再作标记。

(二)荧光素要求 异硫氰酸荧光素最常用

要求:

①应具有能与蛋白质分子形成共价键的化学基团,与蛋白质结合后不易解离,而未结合的色素及其降解产物易于清除;

荧光效率高,与蛋白质结合后,仍能保持较高的荧光效率;

③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明;

④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质;

⑤标记方法简单、安全无毒;

⑥与蛋白质的结合物稳定,易于保存。

(三)抗体的荧光素标记

1.搅拌法:适用于标记体积较大、蛋白含量较高的抗体溶液。优点是标记时间短、荧光素用量少。但易引起较强的非特异性荧光染色。

2.透析法:适用于标记样品量少、蛋白含量低的抗体溶液。此法标记比较均匀,非特异染色也较低。

(四)荧光素标记抗体的纯化

抗体标记完成后,还应对标记抗体作进一步纯化,以去除未结合的游离的荧光素。

纯化方法可采用透析法或层析分离法。

(五)荧光抗体的鉴定

1.荧光素与蛋白质的结合比率 荧光素与蛋白的过量结合是非特异荧光着色的来源之一,而未结合者有抑制特异性荧光抗体反应的作用。

荧光素结合到蛋白上的量的重要指标是荧光素与蛋白质的结合比率(F/P)。比值越大,则抗体结合的荧光素越多,反之则结合越少。一般用于组织切片的荧光抗体,其F/P=1.5为宜,用于活细胞染色F/P=2.4为宜。

2.抗体效价 可以采用双向免疫扩散试验测定,抗原含量为1g/L时,抗体效价>1:16者较为理想。

3.抗体特异性①吸收试验:向荧光抗体中加入过量相应抗原反应后,再用于阳性标本染色,应不出现明显荧光;②抑制试验:阳性标本先与相应未标记抗体反应,洗涤后,再加荧光抗体染色,荧光强度应受到明显抑制。

(六)荧光抗体的保存

防止抗体失活和防止荧光淬灭。

小量分装,-20℃冻存可保存2~3年。

真空干燥后可长期保存。

稀释后的抗体不宜长时间保存,在4℃可保存1~3天。

以上是小编为大家整理的内容,希望对大家有所帮助,更多关于临床检验技师的资讯请关注医学教育网! 

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