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测定酶活性浓度的两大类方法分别是什么呢?

2020-05-13 19:58 医学教育网
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测定酶活性浓度的两大类方法分别是什么呢?跟着小编来学习一下吧!

1.固定时间法(取样法、终点法、两点法)

先让酶与底物在一定温度下作用一段固定的时间,然后停止酶反应,加入试剂进入化学反应呈色测出底物和产物的变化。

用这类方法测酶活性浓度,必须保证酶和底物在所选定的温度下作用时间要很精确,否则将引起较大误差。

该法最基本的一点是停止反应后才测定底物或产物的变化。

2.连续监测法(速率法)

连续监测法具有测定准确等众多的优点,随着科学技术的发展,自动生化仪的使用,正在逐步取代“固定时间法”。实际工作中,测酶活性浓度常用酶偶联法。

最简单的酶偶联反应为以下模式:

图片3

A:底物

B:待测酶产物(不能直接测定)

C:指示酶产物(可以直接测定)

Ex:待测酶

Ei:指示酶

如果一些酶反应找不到合适的指示酶与其直接偶联,可以加入另一种酶,将两者连接起来,模式如下:

图片4

酶偶联反应与一般酶反应的一个重要区别是有一个明显的延滞期。从酶反应开始至稳态期间,指示酶反应较慢且不稳定,称为延滞期。

反应体系中不应有中间产物堆积,否则将导致误差。

以上是小编为大家整理的内容,希望对大家有所帮助,更多关于临床检验主管技师的资讯请关注医学教育网! 

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