亚急性心内膜炎的诊断需要综合考虑患者的临床表现、实验室检查和影像学检查等多方面因素。

临床表现方面，患者常有发热症状，热型不规则，可为弛张热或间歇热，体温多在37.5℃ - 39℃之间，少数患者体温可正常。还可能出现乏力、盗汗、进行性贫血、脾肿大等全身性症状。心脏方面，原有心脏杂音的性质、强度可发生改变，或出现新的杂音。此外，还可能有一些周围体征，如瘀点，可出现在任何部位，以锁骨以上皮肤、口腔黏膜和睑结膜常见；指（趾）甲下线状出血；Roth斑，为视网膜的卵圆形出血斑，中心呈白色；Osler结节，为指（趾）垫出现的豌豆大的红或紫色痛性结节；Janeway损害，为手掌和足底处直径1 - 4mm无痛性出血红斑。

实验室检查中，血培养是诊断菌血症和感染性心内膜炎的最重要方法。对于未经治疗的亚急性患者，应在第一日间隔1小时采血1次，共3次。如次日未见细菌生长，重复采血3次后，开始抗生素治疗。已用过抗生素者，停药2 - 7天后采血。每次取静脉血10 - 20ml作需氧和厌氧培养，至少应培养3周。血常规可显示进行性贫血，白细胞计数正常或轻度升高，分类计数轻度核左移。血沉大多增快。免疫学检查可发现25%的患者有高丙种球蛋白血症，80%的患者出现循环中免疫复合物。

超声心动图检查能发现赘生物、瓣叶穿孔、腱索断裂、瓣环脓肿等，对诊断感染性心内膜炎有重要价值。经胸超声心动图可检出50% - 75%的赘生物，经食管超声心动图可检出＜5mm的赘生物，敏感性高达95%以上。

目前临床诊断多采用改良的Duke诊断标准，主要标准包括血培养阳性和心内膜受累证据（超声心动图发现赘生物、脓肿等或新出现的瓣膜反流）；次要标准有基础心脏病或静脉滥用药物史、发热、血管现象（如瘀点、栓塞等）、免疫现象（如Osler结节、Roth斑等）和微生物学证据（血培养但不符合