①基团影响：C₁₁-酮基的反应速度快于C₁₁-羟基甾体；C₂₁-羟基酯化后较其母体羟基的反应速度慢；当酯化了的基团为三甲基醋酸酯、磷酸酯或琥珀酸酯时，反应更慢。

　　②溶剂和水分的影响：含水量大时会使呈色速度减慢，但含水量不超过5%时，对结果几无影响，因此可采用95%乙醇。

　　③碱的种类及加入顺序的影响：在各类碱中，采用氢氧化四甲基铵能得到满意结果，故最为常用。以先加四氮唑盐溶液再加碱液较好。

　　④空气中氧及光线的影响：反应及其产物对光敏感，故应避光。

　　⑤温度与时间的影响：一般室温或30℃恒温条件下显色。中国药典多数医学教育|网收集整理25℃暗处反应40～45min.