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包被|封闭和抗体匹配试验

2018-02-08 13:44 来源:
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包被|封闭和抗体匹配试验是检验技士考试的内容,医学教育网搜集整理相关内容供大家参考。

包被:将抗体或抗原结合在固相载体上的过程。

包被方法(加样,洗板):用包被缓冲液(pH9.6碳酸盐,pH7.4磷酸盐)将欲包被的抗原或抗体稀释到一定浓度(3~10ug/ml),包被提及为100~150ul/well.包被条件37摄氏度2~6h或4摄氏度过夜。用于包被的蛋白质浓度(10ng/ml-20ng/ml)不宜过大,以免形成多层聚集。

封闭:1~5%牛血清白蛋白或5~20%小牛血清在包被一次反应板,高浓度蛋白占据空白位点(包被液蛋白浓度很低,造成固相载体表面常剩余少量未吸附位点,课非特异地吸附标本中的蛋白质及酶标记物,形成非特异性结合导致本底偏高)消除干扰。

抗体匹配试验:双抗体夹心法测定抗原,当使用两种单克隆抗体作为固相抗体和酶标抗体时,需进行抗体匹配试验,一避免空间位阻等其他不利于夹心复合物形成的影响因素,获得较好的工作曲线。

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