单克隆抗体的生产是一个复杂且精细的过程,主要包括以下几个步骤:
1. 免疫动物:首先选择合适的动物(通常是小鼠),用目标抗原注射这些动物,以刺激它们产生特异性抗体。这个过程需要反复几次,确保动物体内产生了足够量的目标抗体。
2. 融合细胞制备:从免疫过的动物脾脏中提取B淋巴细胞,并与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。这种细胞既具有无限增殖的能力(来自骨髓瘤细胞),又能分泌特异性单克隆抗体(来自B淋巴细胞)。
3. 筛选和克隆:将上述获得的混合细胞悬液稀释后接种到96孔板中,利用选择性培养基筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。然后通过有限稀释法或其他方法进一步纯化,得到单个细胞来源的杂交瘤株。
4. 扩增与保存:将筛选出来的阳性克隆进行大规模扩增,并采用液氮低温保藏以备长期使用。
5. 抗体生产:可以选择在动物体内或无菌条件下培养杂交瘤细胞来获得单克隆抗体。前者称为腹水法,后者则是在生物反应器中进行大规模的细胞培养。
6. 纯化与检测:收集含有单抗的上清液或者腹水,经过亲和层析、离子交换等步骤纯化得到高纯度的单克隆抗体,并通过各种生化及免疫学方法验证其特异性、效价等性质。
7. 应用或商品化:根据需要将制备好的单克隆抗体用于科研实验、诊断试剂盒开发或是治疗性药物的研发中去。对于后者,还需要经过严格的临床前和临床试验,确保安全性和有效性后才能上市销售。
1. 免疫动物:首先选择合适的动物(通常是小鼠),用目标抗原注射这些动物,以刺激它们产生特异性抗体。这个过程需要反复几次,确保动物体内产生了足够量的目标抗体。
2. 融合细胞制备:从免疫过的动物脾脏中提取B淋巴细胞,并与骨髓瘤细胞进行融合,形成杂交瘤细胞。这种细胞既具有无限增殖的能力(来自骨髓瘤细胞),又能分泌特异性单克隆抗体(来自B淋巴细胞)。
3. 筛选和克隆:将上述获得的混合细胞悬液稀释后接种到96孔板中,利用选择性培养基筛选出能产生所需抗体的杂交瘤细胞。然后通过有限稀释法或其他方法进一步纯化,得到单个细胞来源的杂交瘤株。
4. 扩增与保存:将筛选出来的阳性克隆进行大规模扩增,并采用液氮低温保藏以备长期使用。
5. 抗体生产:可以选择在动物体内或无菌条件下培养杂交瘤细胞来获得单克隆抗体。前者称为腹水法,后者则是在生物反应器中进行大规模的细胞培养。
6. 纯化与检测:收集含有单抗的上清液或者腹水,经过亲和层析、离子交换等步骤纯化得到高纯度的单克隆抗体,并通过各种生化及免疫学方法验证其特异性、效价等性质。
7. 应用或商品化:根据需要将制备好的单克隆抗体用于科研实验、诊断试剂盒开发或是治疗性药物的研发中去。对于后者,还需要经过严格的临床前和临床试验,确保安全性和有效性后才能上市销售。

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