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色谱法是目前分离三萜类化合物最常用的方法，通常采用多种色谱法相组合的方法。

（1）吸附柱色谱法：

①常用方法，可用于分离各类三萜化合物。

②依据所用的吸附剂性质的不同，分为正相吸附柱色谱和反相吸附柱色谱。

③正相吸附柱色谱的吸附剂常用硅胶。

④反相柱色谱通常以键合相硅胶Rp-18、Rp-8或Rp-2等为填充剂。

（2）分配柱色谱法：

多用于分离皂苷，常用硅胶等作为支持剂，固定相为3%草酸水溶液等，流动相为含水的混合有机溶剂：如氯仿-甲醇-水，正丁醇-水等。

（3）高效液相色谱法：

是目前分离皂苷类化合物最常用的方法，分离效能较高。医学|教育网搜集整理用于皂苷的分离制备一般采用反相色谱柱，以甲醇-水、乙腈-水等系统为洗脱剂。

（4）大孔树脂柱色谱：

适用于皂苷的精制和初步分离。

操作：将含有皂苷的水溶液通过大孔树脂柱后，先用水洗涤除去糖和其他水溶性杂质，然后再用浓度由低到高的甲醇或乙醇依次进行梯度洗脱，极性大的皂苷可被l0%～30%的醇洗脱下来，极性小的皂苷则被50%以上的醇洗脱下来。

（5）凝胶色谱法：

分子筛的原理来分离分子量不同的化合物，在用不同浓度的甲醇、乙醇或水等溶剂洗脱时，各成分按分子量递减顺序依次被洗脱下来。即分子量大的皂苷先被洗脱下来，分子量小的皂苷后被洗脱下来。应用较多的是在有机相中使用的Sephadex LH-20.