摘要目的：探讨白细胞介素1β（interleukin-1β，IL-1β）和肿瘤坏死因子α（tumornecrosisfactorα，TNFα）对牙周组织的作用。方法：将IL-1β、TNFα注入到兔的牙周组织，以生理盐水为对照，不同时期取材做组织学观察和评价。结果：实验组15天后牙龈组织血管扩张充血，牙槽骨改建活跃，有大量的骨吸收陷窝及破骨细胞，并有新骨形成和破骨细胞出现；30天后仅表现为大量的骨陷窝及破骨细胞，无成骨现象，且以联合应用IL-1β、TNFα组最显著。结论：IL-1β、TNFα均能引起牙龈炎症反应、附着上皮和牙槽骨的破坏，提示IL-1β、TNFα在牙周组织疾病中有作用。

　　关键词　白细胞介素1β肿瘤坏死因子α牙周组织

　　破骨细胞活化因子（osteoclastactivatingfactor，OAF）是引起牙槽骨破坏的重要因素，其中白细胞介素1（interleukin-1，IL-1）和肿瘤坏死因子（tumornecrosisfactor，TNF）是主要因子［1］，它们不仅有破骨作用，而且有成骨作用。本实验将IL-1β和TNFα直接注入兔的牙周组织后，观察其组织病理学变化，目的是通过动物实验探讨IL-1β和TNFα对牙周组织的作用，探讨其发病机理，并期望能指导临床预防和治疗牙周病。

　　材料与方法

　　1.材料：将24只健康大耳白兔随机分为4组，每组6只，生理盐水对照组（A），IL-1β组（B），TNFα（组）（C），IL-1β和TNFα联合组（D）。IL-1βα和TNFα购自中国军事医学科学院生物制剂研究中心。

　　2.方法：麻醉动物，消毒，在双侧上、下磨牙颊侧龈缘下3mm附着龈处注射给药，对照组给予生理盐水。各组给药3次后，第15天各组均处死3只，其余的再给药3次，第30天全部处死。给药间隔时间和每次给药剂量（见表1）。

表1　给药间隔时间和每次剂量

　　3.标本处理及组织学染色：处死动物，取兔注射部位的牙齿及牙周组织，肉眼观察并照相，标本冲洗后置于10%福尔马林液中固定48h，组织修复后置入乙二氨四乙酸（ethylendiaminotetraaceticacid，EDTA）脱钙液中，常规脱水，浸蜡，包埋，制备6～8μm颊舌向纵切片，HE染色，组织学观察并照相。

　　结果

　　1.肉眼观察：A组牙龈组织呈粉红色，无充血水肿，无炎症性改变。B、C、D组分别在用药10d，15d，7d牙龈组织轻度充血。

　　2.组织学观察：A组血管无扩张充血，牙槽骨及牙骨质无破坏，牙周膜纤维排列规则。B、C、D组用药15d均可见血管明显扩张充血，牙槽骨改建活跃，在牙槽嵴顶及固有牙槽骨可见大量骨吸收陷窝和多核破骨细胞，在骨吸收基础上可见骨嗜硷性线增强，新骨形成和成排的成骨细胞，骨新生后再吸收。C、D组牙周膜间隙扩大，成纤维细胞丰富，B、C、D组用药30d，在牙槽嵴顶及固有牙槽骨只见明显的骨吸收陷窝及多核破骨细胞，而无新生骨及成骨细胞。D组与B、C组比较可见附着上皮破坏，牙骨质表面出现明显吸收，牙周膜主纤维排列紊乱，极性丧失，个别区域纤维束中断。（图1～4）

图1　B、C、D组15d，血管扩张充血，牙槽骨改建活跃（HE×20）

图2　B、C、D组30d，只见骨吸收陷窝及破骨细胞（HE×20）

图3　D组30d，牙骨质表面吸收（HE×20）

图4　D组30d，牙周膜主纤维束排列紊乱（HE×20）

　　讨论

　　1.IL-1β对牙周组织的作用

　　牙周组织中的上皮细胞、单核吞噬细胞能分泌IL-1，因此学者们推测IL-1在牙周组织的免疫应答、炎症反应及牙槽骨吸收中起到一定的作用。Charon等人［2］应用胸腺增殖试验检测龈沟液中的IL-1，发现炎症区IL-1浓度明显高于非炎症区，Jandinski等人［3］利用免疫荧光技术，在正常的牙龈乳头中及中度、重度牙周炎牙龈乳头中均发现IL-1β阳性细胞数与牙周组织破坏有关。IL-1刺激骨吸收作用很强，体外作用浓度为1.3×10－12～3.1×10－10mol，半最大刺激浓度为1.4×10－11mol［1］。本研究每次以1000u/0.1ml的剂量给药，结果表明IL-1β对牙周软组织能够引起明显的炎症反应，对牙槽骨亦具有明显的作用。应用IL-1β初期对牙槽骨既有破骨细胞产生又有成骨细胞存在，提示应用IL-1β15天左右既有显著的破骨作用，同时也有显著的成骨作用；但是在后期（应用IL-1β30d）只表现出显著的破骨作用而无成骨作用。

　　2.TNF α对牙周组织的作用

　　TNF α对牙周组织的作用主要与TNF的浓度有关，浓度的不同对骨吸收的作用不同。Pluijm等［4］指出低浓度的TNF增加成熟骨细胞的数量，高浓度的TNF几乎没有见到成熟的破骨细胞。有关TNF与牙周炎的关系研究报道不多，对TNF在牙周炎牙槽骨的吸收中的作用尚缺乏一致意见。TNF的破骨吸收活性是IL-1β的1/1 000，其作用浓度为10－7～10－9mol， 最大活性浓度为10－7mol［1］。本研究结果表明，TNF浓度100 000u/ml注射于兔的牙龈组织中，15d牙龈组织发生轻度充血，在时间上较IL-1β炎症反应要迟，但反应程度一致。组织病理学表现二者也一致，同时出现明显骨吸收及成骨作用；注射30d只有破骨吸收而无成骨作用。提示应用浓度为100 000u/ml的TNF α作用于牙槽骨组织，其破骨作用与用药次数和时间相关。用药次数少和时间短，对牙槽骨既有破骨作用又有成骨作用；用药次数多和时间长，只有破骨作用而无成骨作用。

　　3.IL-1β与TNF α对牙周组织的联合作用

　　牙周病发病过程不是单一发病因素。本研究设立了IL-1β与TNF α联合作用牙周组织的实验组，观察了IL-1β和TNF α联合应用对兔牙周组织的作用。实验结果提示IL-1β与TNF α联合作用于兔的牙周组织，一方面引起牙龈组织炎症的程度比单纯应用IL-1β、TNF α严重，在炎症发生的时间上比单独纯应用IL-1β、TNF α提前；但对牙槽骨破坏吸收方面基本与单纯应用IL-1β、TNF α反应相同。IL-1β与TNF α联合应用对邻近牙齿的牙骨质有破坏吸收作用，同时对附着上皮及牙周膜也有破坏作用。

　　作者单位：长春市（130041）白求恩医科大学口腔医学院

　　参考文献

　　1.张炜真。 破骨细胞活化因子及其在牙周炎发病中的作用。 国外医学口腔医学分册，1994， 21（3）：161～165

　　2.Charon JA， Luger TA， Mergenhagen SE， et al. Increased thymocyte activating factor in human gingival inflammation. Infect Immunol， 1982，38：1190

　　3.Jandinski JJ， Stashenko P， Feder LS， et al. Localization of interleukin 1β in human periodontal tissue. J Periodont， 1991，62：36

　　4.Vander Pluijm G， Most W， vander Wee-Pals， et al. Two distinct effect of recombinant human tumor necrosis factor-α on osteoclast development and subsequent resorption of ineralizde maxtrix. Endocrinol， 1991，129：1596