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筛选CD4结合蛋白的酵母双杂交饵载体构建及功能鉴定

2009-03-17 14:46 医学教育网
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  摘 要:目的构建用于筛选人CD4结合蛋白的酵母双杂交饵载体,并对其功能进行鉴定。

  方法 RT-PCR扩增编码CD4的cDNA.构建双杂交饵载体pAS2-1-CD4,并转化入宿主酵母菌Y190中。通过测定报告基因——β-半乳糖苷酶的活性,判断饵载体自激活报告基因能力。将CD4的已知HIV配体gp120构建入猎物载体pACT2,转入重组菌Y190/pAS2-1-CD4.检测其报告基因活性,鉴定pAS2-1-CD4是否具有筛选CD4结合蛋白的能力。

  结果 DNA序列测定证实,获得了编码CD4蛋白的cDNA序列。β-半乳糖苷酶活性测定表明,pAS2-1-CD4单独无自激活能力,与猎物载体pACT2-gp120能够发生相互作用,激活报告基因表达。

  结论 构建了酵母双杂交饵载体pAS2-1-CD4,为筛选CD4结合蛋白(尤其是筛选病毒编码的CD4配体),提供了技术平台。

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