【摘要】  目的：研究人类白细胞抗原G（HLAG）在子宫内膜异位症患者在位和异位内膜组织中的表达，探讨HLAG分子在内异症发生发展中的作用。 方法：采用链霉素抗生物素蛋白过氧化物酶（SP）法检测子宫内膜异位症患者19例在位子宫内膜和30例异位内膜中HLAG分子的表达水平， 以30例非子宫内膜异位症患者的子宫内膜作为对照。 结果：内异症在位子宫内膜和异位内膜HLAG的阳性表达率（42%，53%）均显著性高于对照组正常子宫内膜（P<0.01），但在内异症在位内膜和异位内膜之间HLAG的阳性表达率无显著性差异（P>0.05）。 结论：异常表达的HLAG分子可能在内异症的发生发展过程中发挥着作用。

　　【关键词】  人类白细胞抗原G； 子宫内膜异位症； 免疫组织化学

　　0引言

　　子宫内膜异位症（endometriosis，简称内异症）是妇产科常见多发病，发病率达10%～15%［1］，近年来有逐渐增高的趋势。 已有研究表明，内异症是一种免疫性疾病，其发生与机体的免疫应答系统密切相关。 人类白细胞抗原（HLA）是人类的主要组织相容性复合物，以往大多都是研究经典HLA分子与内异症的相关性，而极少涉及非经典分子。 HLAG分子属于非经典的HLAⅠ类分子，它参与机体的免疫调节，主要表现为免疫抑制功能。 我们通过测定内异症患者在位和异位内膜组织中HLAG分子的表达，探讨HLAG在子宫内膜异位症发生发展中的作用。

　　1对象和方法

　　1.1对象

　　标本来源于200412/200510在我院经剖腹或腹腔镜手术且病理检查证实为卵巢子宫内膜异位囊肿的患者。 其中，异位内膜30例，年龄37～51（43.5±4.9）岁，在位子宫内膜19例，年龄40～51（45.3±4.2）岁。 对照组为30例非子宫内膜异位症患者且经病理证实的正常子宫内膜，年龄39～54（44.6±4.62）岁。 两组患者均为湖北籍汉族女性，术前3 mo内均未患过感染性疾病，未用内异症治疗药物或激素类药物，未接受过免疫抑制剂治疗。 生化及Ｘ线摄片检查均无肝炎、糖尿病、结核、肿瘤或其他自身免疫性疾病。 两组患者年龄差异无显著性（P>0.05）， 无血缘关系。抗HLAG分子mAb（美国Alexis公司），SP超敏试剂盒（福州迈新生物试剂公司）。

　　1.2方法

　　1.2.1标本处理

　　标本经40 g/L甲醛固定，石蜡包埋，3 μm厚连续切片，HE染色，做病理组织学检查。

　　1.2.2免疫组化染色

　　采用SP法，主要步骤如下：①常规处理后，加入第一抗体，即鼠抗人HLAG mAb，湿盒中4℃过夜；②加入第二抗体，即生物素标记的羊抗鼠IgG，37℃湿盒中10 min；③加入链霉菌抗生物素过氧化物酶，37℃湿盒中10 min；④二氨基联苯胺（DAB）显色，常规脱水、透明、中性胶封固。 因HLAG分子在组织分布上有一定的局限性，故选胎盘组织为阳性对照。

　　1.2.3染色结果判断HLAG以子宫内膜细胞质或细胞膜出现棕黄色颗粒为阳性细胞，在400倍光镜下至少观察5个视野，阳性细胞＞5%定义为阳性，≤5%为阴性［2］。

　　统计学处理：采用统计学软件SPSS 10.0进行分析。 各组之间率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有显著性。

　　2结果

　　SP法染色阳性产物为棕黄色，HLAG抗原阳性染色定位于细胞质内或细胞膜上。 对照组正常子宫内膜HLAG抗原的表达均呈阴性。 在内异症组，有8例在位子宫内膜（图1A）和16例异位内膜组织（图1B）中的内膜细胞呈不同程度的阳性染色。 内异症在位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率（42%）显著性高于对照组正常子宫内膜（P<0.01，表1）；内异症异位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率（53%）显著性高于对照组正常子宫内膜（P<0.01）；内异症在位子宫内膜与异位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率无显著性差异（P>0.05）。

　　A：在位子宫内膜； B：异位子宫内膜。表1在位子宫内膜和异位子宫内膜及正常子宫内膜中HLAG抗（略）

　　3讨论

　　HLAG分子主要表现免疫抑制功能，抑制NK细胞、部分T细胞的细胞溶解作用及诱导CD8+T细胞凋亡［3］；HLAG通过调节细胞因子的分泌，使Th1/Th2平衡移向Th2方向，引起免疫抑制［4］。 HLAG还可影响细胞因子的分泌，如IL10，IL13，TNFα，IFNγ等［5］，致使细胞因子分泌紊乱也可能引起机体免疫耐受。

　　我们的研究发现：内异症在位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率（42%）显著性高于对照组正常子宫内膜。 因而推测当在位子宫内膜脱落异位到机体其他部位时，其早已异常表达的HLAG分子可能通过以上几种途径协助该内膜逃避机体的免疫监视，不被清除，并成功种植生长。 而对于没有HLAG分子“保护”的正常子宫内膜异位后将会被机体的免疫系统所识别并清除。 这就可能解释了为什么多数妇女有经血反流现象，但只有少数人发展成为内异症。 由此可见内异症患者在位子宫内膜是不同于正常子宫内膜的，在位子宫内膜中异常表达的HLAG分子可能使其具有异位种植生长的潜能，对于内异症的发生起到一定的作用。

　　我们还发现内异症异位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率（53%）显著性高于对照组正常子宫内膜。 此实验结果与Barrier等［6］的最新研究结果是一致的。 但Hornung等［7］在内异症患者异位内膜中并未检测到HLAG分子的表达，这可能是由于研究对象的选择和样本量过小造成的差异。

　　内异症异位内膜HLAG的阳性表达率略高于其在位内膜，推测可能在腹腔内某些细胞因子的作用下，使脱落后异位种植的内膜即异位内膜HLAG的表达得以上调。 也有相关研究已证实某些细胞因子如IFNγ和IL10可以刺激细胞表达HLAG［8-9］。 而在位子宫内膜与异位子宫内膜HLAG抗原的阳性表达率无显著性差异，说明在位内膜的异常可能才是导致内异症发病的主要原因，也进一步论证了“在位内膜决定论”这一新学说。 有研究发现HLAG分子也异常表达于某些肿瘤细胞如肾细胞癌［10］和基皮细胞癌［11］，说明内异症在其免疫发病机制上与肿瘤细胞的种植免疫可能相类似。 这可能也是内异症表现的临床生物学行为与恶性肿瘤相似的原因。 因此我们认为，HLAG分子的表达可能导致清除逆流子宫内膜碎片的能力下降，使子宫内膜细胞得以黏附、种植和生长，从而增加内异症发生、发展的可能性。

　　【参考文献】［1］冷金华，郎景和。 腹腔镜手术治疗子宫内膜异位症［J］。 中国实用妇科与产科杂志，2003，19（7）：660.

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　　［3］Contini P，Ghio M，Poggi A，et al. Soluble HLAA，B，C and –G molecules induce apoptosis in T and NKCD8+ cells and inhibit cytotoxic T cell activity through CD8 ligation ［J］。 Immunology，2003，33（1）：125-134.

　　［4］Kanai T， Fujii T， Unno N， et al. Human leukocyte antigenGexpressing cells differently modulate the release of cytokines from mononuclear cells present in the decidua versus peripheral blood ［J］。 Reprod Immunol，2001，45（2）：94-99.

　　［5］Rieger L，Hofmeister V， Probe C， et al. Th1 and Th2like cytokine production by first trimester decidual large granular lymphocytes is influenced by HLAGand HLAE ［J］。 Mol Hum Reprod，2002，8（3）：255-261.

　　［6］Barrier BF，Kendall BS，Ryan CE，et al. HLAG is expressed by the glandular epithelium of peritoneal endometriosis but not in eutopic endometrium ［J］。 Hum Reprod，2006，21（4）：864-869.

　　［7］Hornung D，Fujii E，Lim KH，et al. Histocompatibility leukocyte antigenG is not expressed by endometriosis or endometrial tissue ［J］。 Fertil Steril，2001，75（4） ：814-817.

　　［8］Mizuno S，Emi N，Kasai M，et al. Aberrant expression of HLAG antigen in interferon gammastimulated acute myelogenous leukaemia ［J］。 Br J Haematol，2000，111（1）：280-282.

　　［9］Carosella ED，RouasFreiss N，Paul P，et al. HLAG： A tolerance molecule from the major histocompatibility complex ［J］。 Immunol Today，1999，20（2）：60-62.

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　　［11］Urosevic M，Kempf W，Zagrodnik B，et al. HLAG expression in basal cell carcinomas of the skin recurring after radiotherapy ［J］。 Clin Exp Dermatol，2005，30（4）：422-425.