直接测定FT4 　

　　因为游离甲状腺激素在周围组织，直接测定FT4 可免于TT4 水平解释错误。TT4 水平受结合蛋白影响，因此血清FT4 水平能较TT4 更为准确诊断甲状腺功能情况。直接测定FT4 最准确的是平衡透析法，该方法耗时，费用高，技术要求也高，大多数商用实验室不能提供。这一方法使结合与游离激素分开。测定血清FT4 的金标准是含有125I-T4 血清夜间平衡透析法。FT4 的百分率计算公式是：FT4 （%）＝透析液中总计数/血清总125I-T4 计数X总T4 浓度。在药箱上有最简单的转换公式；FT4 在透析液里经免疫试验测定。

　　间接估计FT4 　

　　这些测定容易提供且比较简单，和前述直接测定FT4 相比，结果甚为相符。指数法需要两个独立试验，一个是测定TT4 ，另一个是测定甲状腺激素的结合比或T3 树脂吸附情况。然后，FT4 指数用TT4 和TBG水平，甲状腺激素结合比或T3 树脂吸附计算。然后用TT4 和TBG水平，甲状腺激素结合比或T3 树脂吸附计算游离T4 指数。指数直接与FT4 成比例。免疫试验法与平衡透析法直接测定FT4 作比较进行了标准化，因此报告结果是绝对单位（ng/dl或pmol/l）。两个最常用方法是T4 类似物作二步和一步免疫试验。这些试验并非完全不受结合蛋白或血清中导致TT4 假性增高或降低的那些物质的影响。

　　测定血清TT3 和FT3 　

　　因T3 与TBG紧密结合（虽比T4 少10倍），但不是与转甲状腺蛋白结合。TT3 测定和以上测定TT4 同样方法，也受血清TBG改变和那些作用于TBG结合的那些药物的影响。测定血清中FT3 水平与上述直接和间接测定T4 方法相同。