有以上所述的特征性临床表现可以确立诊断。头颅X线见皮质增厚，额窦扩大，蝶鞍扩大或侵蚀。手X线示指端绒毛状改变，软组织增厚。葡萄糖耐量试验常异常，血清磷一般增高。
肢端肥大症病人，放射免疫测定血浆GH水平典型增高这是估价GH过高分泌的最简单方法。早餐前采集基础状态血标本，正常人，基础GH水平＜5ng/ml.一过性GH增高为正常，需与病理性过高分泌区别。对葡萄糖负荷反应仍然是诊断肢端肥大症的标准。给75g葡萄糖90分钟后，正常人分泌被抑制至＜5ng/ml.介于5~10ng/ml，诊断不能肯定，高值支持诊断GH过度分泌。大多数肢端肥大症病人有高GH值，基础血浆GH水平对监察治疗反应同样重要。血浆胰岛素样生长因子-1（IGF-1），也称作生长介素-C，对所有可疑肢端肥大症病人均应测定。肢端肥大症病人IGF-1水平典型地增高（3~4倍）。IGF-1也可作为治疗反应的监察。成年人IGF-1正常水平典型地介于125~460ng/ml（400~2000IU/L），随着年龄而降低。假如CT和MRI未见垂体肿瘤，垂体GH过高分泌可能是由于肿瘤产生过度的异位GHRH.诊断肯定有赖于证明血浆GHRH增高。
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