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【求助】关于骨骼肌肌纤维型分型染色的方法？
ATP酶方法所需要的试剂主要有：ATP、氯化钙、氯化钴、硫化铵，除ATP外均为常规试剂。主要优点是：ATP酶法的染色对比度比较好，但由于是冰冻切片，故也有许多缺陷，再加上骨骼肌本身的结构，纤维间CT较少，故染色至结束，要形成很好的切片也比较，并且利用酶本身的活性受取材和保存的影响。
大致如下：
1．试验材料
（1）供冰冻切片用样本处理：取材后立即投入液氮，放入冰冻切片机的恒温箱内，用琼脂包裹固定，待琼脂凝固，组织块温度上升到-20℃时再进行切片，切片厚20um左右。
（二）试剂配制
1．酸性预孵液1：0.1mol/L的醋酸盐缓冲液，PH4.25。
2．碱性预孵液：0.1mol/L的甘氨酸缓冲液，PH10.4。
3. 酸性预孵液2：0.1mol/L的醋酸盐缓冲液，PH4.60.
3．洗涤液：1%的氯化钙，0.01mol的巴比妥钠液。
4．ATP酶预孵液：0.1mol的巴比妥钠液2ml，0.18mol的氯化钙液1ml，蒸馏水7ml，腺苷三磷酸（ATP二钠盐）25mg，调至PH9.4。
5．其他：2%氯化钴，1%硫化铵，酒精，二甲苯，中性树胶。
步骤
1．酸预孵育肌球蛋白ATP酶法
1切片再室温下，置酸性预孵育液1中20min。
2切片放入37℃的ATP酶预孵育液中45min。
3 1%氯化钙液洗涤1次，10min，5min时再补加一次1%氯化钙液。
4切片放入2％氯化钴中，3min。
5 0.01mol的巴比妥钠液洗切片6次，每次0.5min。
6 蒸馏水快速浸置洗涤，拿出。
7 入1％硫化氨液20～30s。
8 流水充分冲洗
9 电吹风干燥，切片经逐级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
2．酸性2和碱预孵育肌球蛋白ATP酶法
1切片再室温下，置酸性预孵育液2或碱性预孵育液中20min。
其余步骤同酸预孵液球蛋白ATP酶法2～9
注意：3种方法必须做同一部位，贴片方向也必须一致，通过比较纤维在不同PH值下的染色特性判定纤维的类型
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