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速度记忆!检验职称免疫电泳技术相关考点总结!

2021-04-27 16:50 医学教育网
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免疫电泳技术是检验职称考试会涉及的内容,为了帮助检验职称考生了解,助力检验职称考生复习,医学教育网为大家整理免疫电泳技术相关考点如下:

免疫电泳技术的优点

(一)加快了沉淀反应的速度;

(二)电场规定了抗原抗体的扩散方向,使其集中,提高了灵敏度;

(三)可将某些蛋白组分根据其带电荷的不同而将其分开,再分别与抗体反应。

对流免疫电泳

对流免疫电泳是免疫电泳技术中的一种,还包括免疫电泳、火箭电泳等方法。

在pH值8.6的琼脂凝胶中,抗体球蛋白只带有微弱的负电荷,而且它分子又较大,所以泳动慢,受电渗作用的影响也大,往往不能抵抗电渗作用,故在电泳时,反而向负极倒退。而一般抗原蛋白质常带较强的负电荷,分子又较小,所以泳动快,虽然由于电渗作用泳动速度减慢,但仍能向正极泳动。如将抗原置阴极,抗体置阳极,电泳时,两种成分相对泳动,一定时间后抗原和抗体将在两孔之间相遇,并在比例适当的地方形成肉眼可见的沉淀线。这样由于电泳的作用,不仅帮助抗体定向移动,因而加速了反应的出现,而且也限制了琼脂扩散时,抗原抗体向四周自由扩散的倾向,因而也提高了敏感性,本法比琼脂扩散法的灵敏度要高10~16倍,而且反应时间短,可用于各种蛋白的定性和半定量测定。

火箭免疫电泳

火箭免疫电泳(rocket immunoelectrophoresis,RIEP)是将单向免疫扩散和电泳相结合的一种定量检测技术。

电泳时,含于琼脂凝胶中的抗体不发生移动,而在电场的作用下促使样品中的抗原向正极泳动。当抗原与抗体分子达到适当比例时,形成一个形状如火箭的不溶性免疫复合物沉淀峰,峰的高度与捡样中的抗原浓度呈正相关。因此,当琼脂中抗体浓度固定时,以不同稀释度标准抗原泳动后形成的沉淀峰为纵坐标,抗原浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据样品的沉淀峰长度即可计算出待测抗原的含量;反之,当琼脂中抗原浓度固定时,便可测定待测抗体的含量(即反向火箭免疫电泳)。

免疫电泳法

免疫电泳法是指利用凝胶电泳与双向免疫扩散两种技术结合的实验方法。在电场作用下标本中各组分因电泳迁移率不同而分成区带,然后沿电泳平行方向将凝胶挖一沟槽,将抗体加入沟槽内,使抗原与抗体相互扩散而形成沉淀线。根据沉淀线的数量、位置及形状,以分析标本中所含组分的性质,本实验常用于抗原分析及免疫性疾病的诊断。此法在微量的基础上具有分辨率高,灵敏度高,时间短,是很理想的分离和鉴定蛋白质混合物的方法。用于抗原、抗体定性及纯度的测定。

免疫固定电泳

免疫固定电泳是一种包括琼脂凝胶蛋白电泳和免疫沉淀两个过程的操作。血清IFE可检测IgG、IgM、IgA等及κ轻链、λ轻链。原理是将样本在琼脂平板上作区带电泳,分离后其上覆盖抗血清滤纸,滤纸分别含抗κ轻链、抗λ轻链,或抗各类重链抗血清,当抗体与某区带中的单克隆Ig结合,可形成免疫复合物沉淀,即固定,再通过漂洗与染色,呈现浓而窄的着色区带,即可判别单Ig的轻链和重链的类别。血清样本要求使用免疫项目蓝色管采集静脉血,避免溶血。

交叉免疫电泳

用琼脂糖作支持物,先将抗原经电泳展开,然后在同一玻板上浇注含抗体的琼脂糖凝胶,在后一个凝胶中进行第二次电泳(与第一次电泳方向垂直)。这种方法实际上是在凝胶电泳后进行免疫电扩散。不同抗原形成互相独立的峰状免疫沉淀,至最适抗原/抗体比值处停止运动,沉淀峰的高度和面积与抗原量成比例关系。用此法可进行各种抗原的定量测定。

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