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常用的抗血清纯化方法有哪些?

2025-05-05 10:06 来源:正保医学教育网
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在临床上,抗血清的纯化是制备高特异性、高效价抗体的重要步骤。常用的抗血清纯化方法包括:
1. 盐析法:利用不同蛋白质在一定浓度的中性盐溶液中的溶解度差异来实现分离,最常用的是硫酸铵沉淀法。
2. 凝胶过滤层析:根据分子量大小的不同将目标蛋白与其它小分子物质分开。当混合物通过凝胶柱时,大分子无法进入凝胶颗粒内部而较快流出;相反地,小分子可以扩散至凝胶孔隙中,移动速度较慢,从而实现分离。
3. 离子交换层析:基于蛋白质表面电荷的不同进行分离。选择合适的离子交换剂,在特定pH条件下使目标蛋白与其他杂质分开。
4. 亲和层析:利用抗原-抗体之间的特异性结合原理,将某种配体(如抗原、抗体等)固定在固相支持物上形成亲和介质,当含有目的蛋白质的样品流经此介质时,目的蛋白质会被特异地吸附下来,其他非目标成分则被洗脱掉。
5. 超滤法:通过半透膜技术去除小分子杂质,并浓缩目标蛋白。适用于大体积样本处理以及初步纯化过程。

这些方法可以单独使用也可以组合起来提高抗血清的纯度和回收率。具体选择哪种方法取决于实验目的、设备条件及成本考虑等因素。

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