（1）取本品粉末1g，加甲醇10ml，在水浴上回流10min，滤过。滤液稍浓缩后，取1ml，加浓盐酸4-5滴及镁粉（或锌粉）少许，在沸水浴中加热3min，溶液呈粉红色。（检查黄酮类）（2）薄层色谱取本品粉末约1g，酸性乙醇回流提取，滤过。滤液回收乙醇，残渣加2%盐酸约5ml溶解，用氨水碱化，氯访提取3次，合并提取液，用无水硫酸钠脱水，滤过。滤液浓缩至1ml，为样品液。以普罗托品、紫堇灵为对照品。点样于碱性硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚-乙醇-氨水（18：2：1：0.05）展开10cm。取出，晾干，喷以改良碘化秘钾试剂，供试品色谱与对照品色谱在相应位置显相同橘红色斑点。（检查生物碱类）

方法名称： 苦地丁－紫堇灵的测定－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定苦地丁中紫堇灵的含量。

本方法适用于罂粟科植物紫堇Corydalis bungeana Turcz.的干燥全草。

方法原理： 本品加甲醇超声处理，放冷，补重，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长289nm处检测紫堇灵的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 0.015mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.7）：取磷酸二氢钾1.58g和磷酸氢二钾0.76g，加水1000mL溶解，混匀，用氢氧化钠试液调节pH值至6.7。

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按紫堇灵峰计算应不低于6000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：甲醇 0.015mol/L磷酸盐缓冲液（pH6.7）=70 30

2.2检测波长：289nm

2.3柱温：室温

试样制备： 1. 称取供试品

精密称定本品粉末（过三号筛）0.5g，为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取紫堇灵对照品适量，加甲醇制成每1mL含40mg的溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，浸泡1小时，超声处理（功率250W，频率33kHz）30分钟，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，续滤液作为供试品溶液。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长289nm处测定紫堇灵（C21H21O5N）的峰面积，计算出其含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p139。