方法名称： 瓦松－槲皮素、山柰素的测定－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定瓦松中槲皮素、山柰素的含量。

本方法适用于景天科植物瓦松Orostachys fimbriatus (Turcz.) Berg.的干燥地上部分。

方法原理： 本品粉末置具塞锥形瓶中，加甲醇-25%盐酸溶液（4：1）的混合溶液，水浴回流，冷却，用甲醇补重，摇匀，滤过，续滤液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长360nm处检测槲皮素、山柰素的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 甲醇-25%盐酸溶液（4：1）的混合溶液

3. 0.5%磷酸溶液

仪器设备： 1 仪器

1.1高效液相色谱仪

1.2色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按槲皮素峰计算应不低于4000。

1.3 紫外吸收检测器

2色谱条件

2.1流动相：甲醇 0.5%磷酸溶液=47 53

2.2检测波长：360nm

2.3柱温：室温

试样制备： 1. 称取供试品

精密称取本品粉末（过三号筛）1g, 为供试品。

2. 对照品溶液的制备

精密称取槲皮素对照品、山柰素对照品适量，加甲醇制成每1mL含槲皮素10mg、山柰素20mg的混合溶液。

3. 供试品溶液的制备

取本品粉末（过三号筛）约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇-25%盐酸溶液（4：1）混合溶液50mL，密塞，称定重量，置水浴中回流1小时，立即冷却，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液10mL和供试品溶液10~20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长360nm处测定槲皮素（C15H10O7）和山柰素（C15H10O6）的峰面积，计算出其含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p47。