方法名称： 牛黄上清丸–黄芩苷的测定--高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定牛黄上清丸中黄芩苷的含量。

本方法适用于中成药牛黄上清丸。

方法原理： 供试品加稀乙醇超声处理后，置水浴上回流提取，并补充丢失的溶剂量，取上清液进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长280nm处检测黄芩苷的吸收值，计算出其含量。

试剂： 1. 甲醇

2. 磷酸

3. 稀乙醇

仪器设备： 1 仪器

1.1高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论板数按黄芩苷峰计应不低于2500。

1.3 紫外吸收检测器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇 水 磷酸 = 40 60 0.2

2.2 检测波长：280nm

2.3 柱温：室温

3 超声波发生器

试样制备： 1.稀乙醇

取乙醇529mL，加水稀释至1000mL，即得。

2. 称取供试品

取本品，剪碎，精密称取1g。

3. 对照品溶液的制备

精密称取在600C减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含60μg的溶液。

4. 供试品溶液的制备

供试品精密加稀乙醇50mL，称定重量，超声处理30分钟，置水浴上回流3小时，放冷，称定重量，用稀乙醇补充丢失的溶剂量，静置，取上清液为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μL，注入高效液相色谱仪，紫外吸收检测器，于波长280nm处测定黄芩苷（C21H18O11）的吸收值，计算出其含量。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，一部，p.378。