reiter wrote:
黄芪皂苷老师及各位高人,因本菜鸟不是天然药物化学专业的,现在做抗肿瘤活性物分离方面的工作,请你指点.
我目前在对微生物代谢产物的氯仿部位筛选展开系统,用氯仿-甲醇-乙醚
在高效板上展开后大致有5个点, 最前沿的1-3个点为大斑点,4斑点小,还有点拖尾,5斑点略微看的到一点黄色.
比例 斑点 90-0-10 80-1-10 60-1-20 30-1-30
Rf 1 0.93 0.93 0.88 0.88
2 0.7 0.68 0.61 0.71
3 0.26 0.53 0.51 0.66
4 0.04 0.28 0.36 0.6
5 0 0.07 0 0
请问:
1.如何进一步筛选, 获得柱层析初始洗脱剂及其配比
2.因不知道哪个成分是重要的, 该如何着手进一步的柱分离
3. TLC与柱层析各参数如何对应起来; 一般以0.3左右作为初始极性,是否每个点的rf都得调节到0.3左右
谢谢
最好都拿到。分到东西再做下步设计方案。
一个个分离。
reiter wrote:
黄芪皂苷兄 怎么那么久不来看看呵
最近忙。原谅/
顺便顶顶。请各战友补充新的东西以及讨论。
以后我们谈谈，实验阶段时期的具体方法。有助于碰到类似的化合物分离时可以借鉴。我还将整理些实验方面的技巧。也希望各位战友一块丰富内容。
黄芪皂苷 wrote:
谢谢你,你说的很有见解.我也比较赞同.希望常来
原来您是沈阳药科大学的啊。。
呵呵
黄芪皂苷老师您好！
我是学生物的研究生，老板给了我一个分离纯化的课题，让我很头疼，因为不是专长，所以想向您请教一下发酵液预处理的问题
您之前也说了，药材提取液在粗分离之前如果不预处理一下对后期操作麻烦很大，我这个原料是放线菌的发酵液，想提取里面有抗菌活性的强极性物质，以前都是直接拿发酵液过大孔树脂D101的
如果我想加入预处理步骤，比如除杂蛋白，用什么方法好呢？因为我的东西对热的稳定性不好，所以让我很犯难，怎么办呢？
还有，我看过有的文献上把微生物的发酵液先浓缩蒸干，然后用甲醇来溶解（也是大极性物质），得到浸膏状物质，这样的操作有什么道理啊？能够除去什么杂质吗？
之前几天就看过您在版里热情应助了，我也非常希望能得到您的指导，谢谢！：）
ZARD wrote:
黄芪皂苷老师您好！
我是学生物的研究生，老板给了我一个分离纯化的课题，让我很头疼，因为不是专长，所以想向您请教一下发酵液预处理的问题
您之前也说了，药材提取液在粗分离之前如果不预处理一下对后期操作麻烦很大，我这个原料是放线菌的发酵液，想提取里面有抗菌活性的强极性物质，以前都是直接拿发酵液过大孔树脂D101的
如果我想加入预处理步骤，比如除杂蛋白，用什么方法好呢？因为我的东西对热的稳定性不好，所以让我很犯难，怎么办呢？
还有，我看过有的文献上把微生物的发酵液先浓缩蒸干，然后用甲醇来溶解（也是大极性物质），得到浸膏状物质，这样的操作有什么道理啊？能够除去什么杂质吗？
之前几天就看过您在版里热情应助了，我也非常希望能得到您的指导，谢谢！：）
这种东西建议用大孔树脂比较合适，如果用离子交换可能需要注意的方面比较多，酸碱和温度等等，类似的东西用比较温和的纯化方法也合适：如凝胶G或LH20等。但价格很昂贵。发酵液的颜色是否很深？G系列除蛋白比较理想。
好的，谢谢您！：）
对，发酵液的颜色很深，色素极性和活性物质的极性类似，所以如果用活性碳只怕损失的会更多，现在只能通过大孔树脂除掉一小部分色素，之后就不知道该怎么办了：（
另外，这个物质TLC的时候用硫酸喷，烘烤都不显色，郁闷啊
楼主您好，我现在也在做生物碱的分离，有点迷茫，想问一下，如果我的生物碱通过碱性氧化铝柱分出单体，还需要进一步的纯化吗？要去打谱的话，大概需要多少量呢？假设我打完谱，解析出是一个单体，我要把它作为对照品，还需要做些什么呢？
ZARD wrote:
对，发酵液的颜色很深，色素极性和活性物质的极性类似，所以如果用活性碳只怕损失的会更多，现在只能通过大孔树脂除掉一小部分色素，之后就不知道该怎么办了：（
另外，这个物质TLC的时候用硫酸喷，烘烤都不显色，郁闷啊
其他显色剂也可以看看，最好是看看你目标化合物结构。
lfq003 wrote:
楼主您好，我现在也在做生物碱的分离，有点迷茫，想问一下，如果我的生物碱通过碱性氧化铝柱分出单体，还需要进一步的纯化吗？要去打谱的话，大概需要多少量呢？假设我打完谱，解析出是一个单体，我要把它作为对照品，还需要做些什么呢？
如果是单体的确认一下。20mg就够了。作为对照的话98%即可/
学习了，好啊
xiaowming wrote:
学习了，好啊
相互学习，欢迎常来。
谢谢楼主！
我现在醇提取后，经过酸溶碱沉，后用氯仿萃取得到的是脂溶性生物碱，通过雷氏盐沉淀法得到了水溶性生物碱，我查了相关资料，发现对水溶性生物碱分离的研究资料特别少，黄芪皂苷老师，如果我要分离的话，跑什么板，一般用什么展开剂，选择什么柱子进行分离呢？还有就是生物碱除了可以用硅胶柱和氧化铝柱，还有什么更好的柱子适合生物碱的分离呢？不好意思我很多东西都不懂
lfq003 wrote:
谢谢楼主！
我现在醇提取后，经过酸溶碱沉，后用氯仿萃取得到的是脂溶性生物碱，通过雷氏盐沉淀法得到了水溶性生物碱，我查了相关资料，发现对水溶性生物碱分离的研究资料特别少，黄芪皂苷老师，如果我要分离的话，跑什么板，一般用什么展开剂，选择什么柱子进行分离呢？还有就是生物碱除了可以用硅胶柱和氧化铝柱，还有什么更好的柱子适合生物碱的分离呢？不好意思我很多东西都不懂
硅胶柱和氧化铝柱都可以，也可以用制备薄层层析。硅胶板或氧化铝板。
搞植化的战友们辛苦了！
你是上海医工院的吧，说的有些过哦
搞天然药物化学的，昆植所最好，其次中科院、协和，然后沈药、南药
黄芪皂苷老师 你好
我前一段时间是做水相部分的 分离得到了一个化合物 现在正在做正丁醇的部分 用的都是反向柱 ，ODS和 MCI
请问一下 这两种柱填料的分离效果有什么不同啊
主要分离的成份是皂苷
qingshuiwuyu wrote:
黄芪皂苷老师 你好
我前一段时间是做水相部分的 分离得到了一个化合物 现在正在做正丁醇的部分 用的都是反向柱 ，ODS和 MCI
请问一下 这两种柱填料的分离效果有什么不同啊
主要分离的成份是皂苷
ODS比较合适。
qingshuiwuyu wrote:
黄芪皂苷老师 你好
我前一段时间是做水相部分的 分离得到了一个化合物 现在正在做正丁醇的部分 用的都是反向柱 ，ODS和 MCI
请问一下 这两种柱填料的分离效果有什么不同啊
主要分离的成份是皂苷
ODS比较合适。
黄芪皂苷老师 你好
再请教你一个问题 我现在做的是两个化合物的 分离 。用的是MCI 的柱子 在用酒精浓度为32%的洗脱时候两者有一定的（就是点样后两种物质在TLC板上有分离）分离效果 。等到两种物质都出来时 就用95%的酒精洗下来 再次上样 这样做有什么问题吗 ？
直接用95%的酒精洗下来会不会 把有些没有用的东西也洗下来 是否洗脱液梯度太小了 ？是否在换了洗脱液浓度后也应该用分布收集器收集点样 ？
我这样做是想能购进度快一点
谢谢了
各位大虾：
小女子又碰见新的问题，特来此地向各位请教呢！
已经毕业的师姐从药材中已经筛选出一种有活性的单体成分，但产率较低，无法继续之后的药理实验，老板命令我加大产量，我就必须找其他的高产量的方法了，查到一篇文献里面介绍的方法产量比现所用的方法高一点，高兴之余也发现了一些问题，遂来此讨教了。
这种化合物是一种香豆素类，也可以说属于黄酮这一大类吧。原来的方法是70%乙醇渗漏，乙酸乙酯萃取，再过硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯洗脱），最后用HSCCC得到单体。文献中的方法是95%乙醇提3次，过聚酰胺柱（30-40目），得到总黄酮成分，再过硅胶柱（100-200目），石油醚：乙酸乙酯洗脱，最后再过硅胶柱（石油醚：丙酮等浓度洗脱），也得到单体。
目前我粉碎了4公斤药材，70%乙醇渗漏，下一步我不知道是不是该用聚酰胺柱层析，因为渗漏后得到的浸膏量很大，用聚酰胺柱是不是有点不现实？但用乙酸乙酯会不会有所损失呢？正在犹豫不决中，非常需要各位高人的指点啊！万分感谢啊！
还有再请教一下 做分离提取我觉得资料特别不好找比如 关于某种植物的研究以及提取分离出的化合物 尤其是一些英文的资料 ，各位有什么指教。
为什么没有哪位前辈高人来帮帮我这个后辈呀？呜呜……
qingshuiwuyu wrote:
黄芪皂苷老师 你好
再请教你一个问题 我现在做的是两个化合物的 分离 。用的是MCI 的柱子 在用酒精浓度为32%的洗脱时候两者有一定的（就是点样后两种物质在TLC板上有分离）分离效果 。等到两种物质都出来时 就用95%的酒精洗下来 再次上样 这样做有什么问题吗 ？（[/color]也可以）
直接用95%的酒精洗下来会不会 把有些没有用的东西也洗下来 是否洗脱液梯度太小了 ？是否在换了洗脱液浓度后也应该用分布收集器收集点样 ？
我这样做是想能购进度快一点 （[color=red]洗完以后柱子再生平衡就可以了）
谢谢了
qingshuiwuyu wrote:
还有再请教一下 做分离提取我觉得资料特别不好找比如 关于某种植物的研究以及提取分离出的化合物 尤其是一些英文的资料 ，各位有什么指教。
找不到文献就自己按照自己的方法分离就可以了。
玉木子 wrote:
各位大虾：
小女子又碰见新的问题，特来此地向各位请教呢！
已经毕业的师姐从药材中已经筛选出一种有活性的单体成分，但产率较低，无法继续之后的药理实验，老板命令我加大产量，我就必须找其他的高产量的方法了，查到一篇文献里面介绍的方法产量比现所用的方法高一点，高兴之余也发现了一些问题，遂来此讨教了。
这种化合物是一种香豆素类，也可以说属于黄酮这一大类吧。原来的方法是70%乙醇渗漏，乙酸乙酯萃取，再过硅胶柱层析（石油醚：乙酸乙酯洗脱），最后用HSCCC得到单体。文献中的方法是95%乙醇提3次，过聚酰胺柱（30-40目），得到总黄酮成分，再过硅胶柱（100-200目），石油醚：乙酸乙酯洗脱，最后再过硅胶柱（石油醚：丙酮等浓度洗脱），也得到单体。
目前我粉碎了4公斤药材，70%乙醇渗漏，下一步我不知道是不是该用聚酰胺柱层析，因为渗漏后得到的浸膏量很大，用聚酰胺柱是不是有点不现实？但用乙酸乙酯会不会有所损失呢？正在犹豫不决中，非常需要各位高人的指点啊！万分感谢啊！
硅胶粗分离比较合适，你主要做工艺吗？如果是又想提高产量的话可以尝试聚酰胺等方法，这样损失少~
zhangna_2511 wrote:
真的非常谢谢楼主,给我们这些初学者提供了宝贵的经验!
谢谢!
黄芪皂苷wrote:
硅胶粗分离比较合适，你主要做工艺吗？如果是又想提高产量的话可以尝试聚酰胺等方法，这样损失少~
老板要求就是要加大量生产，除了要加大药材的量之外，当然也希望能提高产率，同时想节约点时间的（萃取时间太久的），70%乙醇渗漏后浓缩得到的浓缩液挺多的，如果直接上柱的话会不会杂质太多，导致杂质太多吸附在柱上，这样黄酮类物质就比较难吸附呢，同时鞣质又是不可逆吸附的，会不会到最终达不到分离效果？同时实验室有人说量太大上柱也相当难，是这样吗？不知道工艺提取是如何做的？切盼您的回复！
玉木子 wrote:
黄芪皂苷wrote:
硅胶粗分离比较合适，你主要做工艺吗？如果是又想提高产量的话可以尝试聚酰胺等方法，这样损失少~
老板要求就是要加大量生产，除了要加大药材的量之外，当然也希望能提高产率，同时想节约点时间的（萃取时间太久的），70%乙醇渗漏后浓缩得到的浓缩液挺多的，如果直接上柱的话会不会杂质太多，导致杂质太多吸附在柱上，这样黄酮类物质就比较难吸附呢，同时鞣质又是不可逆吸附的，会不会到最终达不到分离效果？同时实验室有人说量太大上柱也相当难，是这样吗？不知道工艺提取是如何做的？切盼您的回复！
大孔树脂可以看看，比较合适。AB*8或D101都可以。这样大量的样品上样没什么问题。
谢谢黄芪皂苷老师的建议，之前没有这方面的经验，我提的主要是甘草中的黄酮，有人建议说用AB-8，但现在不敢试，也不知道怎么去小试 ，不知您能不能给我点建议呢？
玉木子 wrote:
谢谢黄芪皂苷老师的建议，之前没有这方面的经验，我提的主要是甘草中的黄酮，有人建议说用AB-8，但现在不敢试，也不知道怎么去小试 ，不知您能不能给我点建议呢？
请多看看有关的书籍，具体操作你自己找找。水溶液上就可以了，小柱。
黄芪皂苷老师及各位高人，我按照前面所说的，把乙醇提取液浓缩后分别用石油醚、乙酸乙脂和正丁醇萃取，石油醚萃取时分层了，但是用乙酸乙脂萃取时，有黄色不溶物，呈浸膏状在下层，上面乙酸乙脂和母液互溶了，没有分层，正丁醇加入也是这样，这是什么原因？是乳化了吗？有人建议我加点盐，还是没用，这是怎么会事啊？谢谢答复！
