用品及准备

　　基本同淋巴细胞毒试验。

　　方法及内容

　　（1）刺激细胞的处理：有两种方法，一种是将受试细胞悬液用60Co或X射线40Gy照射后的细胞直接接种。另一种是使用丝裂霉素处理。向细胞悬液内加入丝裂霉素（终浓度40mg/ml），置37℃水浴30min，然后用RPM1640培养液洗涤3次。最后将细胞悬浮于1640培养液中计数，调整细胞数至1×10⁶/ml。

　　（2）准备微量加样器，用75%酒精、无菌双蒸水、无菌生理盐水依次各洗3遍。

　　（3）预先准备无菌96孔圆底板，写好标签。

　　（4）按照双向和单向混合培养的实验设计接种细胞。①双向微量混合淋巴细胞培养（MLC-D）对照组，AA、BB每孔加A细胞100μl或B细胞100μl，实验组：AB每孔加A细胞50μl，B细胞50μl。②单向微量混合淋巴细胞培养（MLC-S）。对照组：AAm、BBm每孔加反应细胞50μl，自身刺激细胞50μl；实验组：ABm、BAm每孔加反应细胞50μl，刺激细胞50μl，每孔总液量为100μl，每种组合3～4个复管。

　　（5）培养板置于37℃、含5%CO₂湿润空气环境中培养5d。

　　（6）5d后每孔加入2μl（36kBq）3H-TdR，继续37℃培养。

　　（7）18h后，用细胞收集器将放射性样品收集于玻璃纤维滤纸上，水洗20s，空吸10s。

　　（8）将样品滤纸置于60～80℃烤箱烘干后，移至装有2～3ml闪烁液的测量杯中，待测。

　　（9）用β液体闪烁测量仪，测量每份样品的放射性计数（CPM）。

　　结果判读

　　计算刺激指数SI

　　因本底CPM值都控制在100以下，故本底CPM值可忽略不计。一般无关个体之间MLC的SI＞10。