用品及准备

　　材料 ①50μl加样器；②250μl加样器；③微量反应板；④倒置显微镜；⑤医用液体石蜡油；⑥尼龙纤维棉和聚乙稀塑料管（管径6mm，长160mm）。

　　试剂

　　①抗血清。

　　②兔补体，无天然细胞毒性，效价合格的混合兔血清。

　　③5%伊红-Y溶液。

　　④12%福马林（pH7.0～7.4）。

　　⑤对照组：阳性对照，用兔抗人淋巴细胞血清和抗B淋巴细胞血清；阴性对照，灭活正常人AB型混合血清。

　　⑥淋巴细胞分离液（比重1.077±0.02）。

　　⑦Hanks液（pH6.8～7.4）。

　　⑧20%小牛血清-RPM1640培养液。

　　⑨淋巴细胞洗涤液和淋巴细胞保存液。

　　方法及内容

　　（1）向Terasaki反应板的每孔加10μl液体石蜡油。

　　（2）每反应板最后两孔分别加阳性和阴性对照血清，其余每孔加已知或待检血清1μl.

　　（3）每孔加的淋巴细胞悬液或B淋巴细胞悬液1μl，并轻轻摇动，使其与抗血清完全混匀。

　　（4）室温（20℃±2℃）培养30min，B细胞置于37℃温育箱1h。

　　（5）每孔加兔补体5μl，充分混匀，室温培养1h，B细胞2h。

　　（6）每孔加入5％伊红Y3μl，作用1～3min。

　　（7）每孔加入12％福马林8μl，室温静置1～2h或4℃冰箱过夜，置显微镜下观察结果。

　　注意事项

　　对淋巴细胞毒试验方法有影响的因素很多，所以一般需做多个复本。

　　（1）淋巴细胞：①纯度：沾染的颗粒细胞可吸收抗体，红细胞及血小板可使计数时间减慢，而引起计数误差。②浓度：细胞浓度过低，无法计数，其准确性大大下降，细胞浓度大，造成淋巴细胞集聚成团，影响结果。③pH值：中性为宜，过酸影响细胞致敏，过碱易造成假阳性。

　　（2）抗血清：细胞溶解和抗血清效价低也是引起计数误差的常见原因。

　　（3）加入补体要充足，以克服抗补体因子。

　　（4）染料：离心除去沉淀物与杂质。

　　（5）控制培养温度与时间。